作者Cheinder (w23w)
看板Biotech
标题[求救] RT-PCR 问题
时间Mon Sep 29 23:11:41 2008
各位先进大家好:
我在做RT-PCR部分一直都做不出来, RNA 品质也都有1.8左右在做RT
时有把转出的cDNA拿去测260nm 吸光值约1.4左右(一百倍)进一步做
PCR时测吸光值也有0.33(稀释一百倍) 但是跑胶时marker可以看到
但是要看的基因像是beta-actin,COX-2都没有band 但是吸光值都有
明显的高於空白组的0.1, 但是就是照胶时看不到任何band...但是
之前做就有 条件也没有改变过,用的核酸染剂与Loadinf buffer都
可以清楚的看到marker的band,本来也怀疑是蛋白质污染造成的伪
阳性吸光值,但是测260/280的比值也都有1.9,RT与PCR套组也是用
新的,请问板上的各位高手,一直很纳闷为什麽吸光值有,但是跑胶
就看不到,但是marker 确有清楚的band呢!? 谢谢大家!!
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昂首千丘远 啸傲风间
堪寻敌手共论剑
高处不胜寒
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◆ From: 140.121.155.59
1F：推 yaliu:为什麽cDNA跟PCR产物要测吸光值阿？？是要测浓度吗？ 09/29 23:20
2F：推 yaliu:actin都P不出来，可能某个环节有出了错吧，可以重作一次看看 09/29 23:24
3F：→ yaliu:或者找实验室其他同学测试一下 09/29 23:24
4F：推 sisyphus:rt之後测吸光值是没有意义的 你一开始的rna有没有跑胶 09/30 01:13
5F：→ Cheinder:测吸光值是想比较P出来DNA的浓度 一开始RNA没有跑胶 09/30 11:30
6F：→ Cheinder:但是有测260/280 确认抽出 谢谢你们的回答!!! 09/30 11:30
7F：推 ookubo:P完後直接去测吗？ 这样里面的拉哩拉紮的会影响吸光值吧? 09/30 12:57
8F：→ ookubo:要是连actin都没有，PCR没问题，那可能RNA有问题吧? 09/30 12:59
9F：推 dankai:你还是先把RNA先拿去跑电泳看看~说不定问题就在RNA上!! 09/30 13:38
10F：推 davideason:电泳槽换新buffer,拿RNA跑DNA胶 09/30 14:48