作者jingyi620 (平淡 超凡品味!)
看板Biotech
標題[求救] 抽DNA放overnight 與不放的作用差別
時間Mon Sep 29 12:38:34 2008
這是前天抽DNA時學長問的一個很基本的問題~
起因是因為我第一次抽DNA時放37度overynight沒有任何沉澱物 = = 學姐說應該要有
不過很奇妙的事做到最後加異丙醇時~有些許DNA沉澱 不過量非常少就是了
我使用的方式都是用CTAB萃取蘭花的DNA~ (話說~學長說他的DNA很難抽 = = )
與上次不同的是~這次我放65度沉澱1小時....不過一開始也沒看到什麼
是離心後才看到ㄧ咪咪的東西....
我才剛開始學習實驗~(這也是我第二次抽DNA.......)
有很多步驟都是乖乖聽著學長姐的話照做
也有跟學長姐討論過為什麼沒有沉澱的問題~
不過.....都沒有確且的方法
我也知道要自己去思考每個步驟的意義 & 用途 ~
不過書上好像都沒有解釋步驟的原因~只有看到一堆的不同的potocol >"<
到底該怎麼訓練自己獨立思考的能力呢?
打到最後都不知道自己在說什麼~
感謝看完的人 ~
最後~再追加一個問題
抽DNA時要測幾次O.D.值~學姐交我2次 一次是要回溶 一次是要跑電泳
學長說測要跑電泳的那一次就好了~ 還說我為什麼要亂改步驟 >"<
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 125.230.77.67
1F：推 dankai:我們都放-20 進行沉澱~沒用過37或65度的進行沉澱! 09/29 13:17
2F：→ dankai:37或65度通常我們是用來加速溶解DNA的~測OD我們只測ㄧ次~ 09/29 13:19
3F：→ dankai:除非定量後的DNA在電泳跑的結果有差異..才會再測第二次! 09/29 13:20
4F：推 dankai:而且我記得低溫是促進DNA沉澱的~ 09/29 13:24
5F：推 hungte0928:推樓上~~低溫促進沉澱!! 09/29 13:28
6F：推 asolitary:雖然protocol一堆~~但是靜下心來用基本的物理跟化學知識 09/29 13:47
7F：→ asolitary:想一下為什麼這麼做~~應該很快就懂了~~~ 09/29 13:47
8F：→ jingyi620:謝謝大家~ 我真的太急躁了 09/29 14:22
9F：推 MrCAKE:65度是為了去除DNase活性 09/30 00:59
10F：推 allisa:我們抽完是放-20 overnight目的要讓溶解在水的DNA析出 09/30 17:07
11F：→ allisa:隔天離心就會有pellet了 65度1 hr是其中加完RNase後的步驟 09/30 17:08
12F：→ allisa:讓RNase作用的 這是依我的記憶回答 有錯請指正 謝謝 09/30 17:09
13F：推 allisa:sorry我打錯了 RNase作用是37度1~2hr 09/30 17:12