作者jingyi620 (平淡 超凡品味!)
看板Biotech
标题[求救] 抽DNA放overnight 与不放的作用差别
时间Mon Sep 29 12:38:34 2008
这是前天抽DNA时学长问的一个很基本的问题~
起因是因为我第一次抽DNA时放37度overynight没有任何沉淀物 = = 学姐说应该要有
不过很奇妙的事做到最後加异丙醇时~有些许DNA沉淀 不过量非常少就是了
我使用的方式都是用CTAB萃取兰花的DNA~ (话说~学长说他的DNA很难抽 = = )
与上次不同的是~这次我放65度沉淀1小时....不过一开始也没看到什麽
是离心後才看到ㄧ咪咪的东西....
我才刚开始学习实验~(这也是我第二次抽DNA.......)
有很多步骤都是乖乖听着学长姐的话照做
也有跟学长姐讨论过为什麽没有沉淀的问题~
不过.....都没有确且的方法
我也知道要自己去思考每个步骤的意义 & 用途 ~
不过书上好像都没有解释步骤的原因~只有看到一堆的不同的potocol >"<
到底该怎麽训练自己独立思考的能力呢?
打到最後都不知道自己在说什麽~
感谢看完的人 ~
最後~再追加一个问题
抽DNA时要测几次O.D.值~学姐交我2次 一次是要回溶 一次是要跑电泳
学长说测要跑电泳的那一次就好了~ 还说我为什麽要乱改步骤 >"<
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◆ From: 125.230.77.67
1F：推 dankai:我们都放-20 进行沉淀~没用过37或65度的进行沉淀! 09/29 13:17
2F：→ dankai:37或65度通常我们是用来加速溶解DNA的~测OD我们只测ㄧ次~ 09/29 13:19
3F：→ dankai:除非定量後的DNA在电泳跑的结果有差异..才会再测第二次! 09/29 13:20
4F：推 dankai:而且我记得低温是促进DNA沉淀的~ 09/29 13:24
5F：推 hungte0928:推楼上~~低温促进沉淀!! 09/29 13:28
6F：推 asolitary:虽然protocol一堆~~但是静下心来用基本的物理跟化学知识 09/29 13:47
7F：→ asolitary:想一下为什麽这麽做~~应该很快就懂了~~~ 09/29 13:47
8F：→ jingyi620:谢谢大家~ 我真的太急躁了 09/29 14:22
9F：推 MrCAKE:65度是为了去除DNase活性 09/30 00:59
10F：推 allisa:我们抽完是放-20 overnight目的要让溶解在水的DNA析出 09/30 17:07
11F：→ allisa:隔天离心就会有pellet了 65度1 hr是其中加完RNase後的步骤 09/30 17:08
12F：→ allisa:让RNase作用的 这是依我的记忆回答 有错请指正 谢谢 09/30 17:09
13F：推 allisa:sorry我打错了 RNase作用是37度1~2hr 09/30 17:12