作者aikawa7090 (小紅)
看板Biotech
標題[求救]pfu taq mixture成分配法
時間Mon Sep 22 14:24:48 2008
各位大大好，小弟最近在從cDNA做PCR，P出想要的gene，由於片段長度約
700Kb左右，且要的cDNA片段之後再transfect到細胞中看表現的，所以希
望能達到PCR出來的片段不要有任何錯誤^^
目前遇到的問題是，用taq能夠PCR出想要的片段，但是同樣的condition下，
用Pfu就PCR不出來，老師建議我用taq做PCR，並加入一點pfu做proofreading，
可是一加入pfu就PCR不出來了(連個band都沒有= =)
所以想請問大家，有沒有大大手上有廠商的pfu tag mixture的protocol，也就
是PCR的sample成分要如何搭(pfu加多少，taq加多少，dNTP加多少等等)
麻煩大家了，感恩~~
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◆ From: 192.192.90.35
1F：推 soom:Taq : pfu = 8:1 ~ 16:1 其他照舊 09/22 14:37
2F：→ aikawa7090:請問樓上大大，我之前用8:1做不出來，所以不知道是Mg離 09/22 14:53
3F：→ aikawa7090:子濃度不夠還是buffer成分不對><麻煩有沒有詳細的potoc 09/22 14:54
4F：→ aikawa7090:ol可以幫幫我^^ 09/22 14:54
5F：推 soom:其實我之前遇到問題就會換一管enzyme(機率真的非常小) 09/22 15:12
6F：推 soom:基本上都會做得出來 不用改protocol/condition 09/22 15:13
7F：推 soom:抱歉無法幫上忙 09/22 15:13
8F：→ aikawa7090:謝謝你唷~感謝^^ 09/22 15:28
9F：推 untilnow:700kb 好大.... 09/22 20:00
10F：推 yaliu:哇～～700kb真的好大喔～～cDNA有這麼大到700kb的喔？ 09/22 20:45
11F：→ mtdas:titin的cDNA有100kb(逃) 09/22 21:33
12F：推 boyo:pfu一ul的價錢可以去吃吃到飽一次 Orz 09/22 21:48
13F：推 nixo:哪裡的吃到飽這麼便宜？ 09/22 23:06
14F：推 silverberry:試過提高 dNTP 的濃度就批出來~ 不過後來換用 Phusion 09/22 23:14
15F：→ silverberry:就沒遇過這個問題了~ 09/22 23:15
16F：推 tsubasawolfy:pfu有這麼貴-口-? 09/22 23:19
17F：推 wensing:禾鑫生技 pfu 超便宜又很好用！ 09/23 02:15
18F：推 sGoat:pfu的condition與Taq的不太相同,建議你看一下pfu的使用說明 09/23 11:11
19F：→ aikawa7090:阿...打錯...是700bp(囧) 09/24 17:21