作者aikawa7090 (小红)
看板Biotech
标题[求救]pfu taq mixture成分配法
时间Mon Sep 22 14:24:48 2008
各位大大好，小弟最近在从cDNA做PCR，P出想要的gene，由於片段长度约
700Kb左右，且要的cDNA片段之後再transfect到细胞中看表现的，所以希
望能达到PCR出来的片段不要有任何错误^^
目前遇到的问题是，用taq能够PCR出想要的片段，但是同样的condition下，
用Pfu就PCR不出来，老师建议我用taq做PCR，并加入一点pfu做proofreading，
可是一加入pfu就PCR不出来了(连个band都没有= =)
所以想请问大家，有没有大大手上有厂商的pfu tag mixture的protocol，也就
是PCR的sample成分要如何搭(pfu加多少，taq加多少，dNTP加多少等等)
麻烦大家了，感恩~~
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◆ From: 192.192.90.35
1F：推 soom:Taq : pfu = 8:1 ~ 16:1 其他照旧 09/22 14:37
2F：→ aikawa7090:请问楼上大大，我之前用8:1做不出来，所以不知道是Mg离 09/22 14:53
3F：→ aikawa7090:子浓度不够还是buffer成分不对><麻烦有没有详细的potoc 09/22 14:54
4F：→ aikawa7090:ol可以帮帮我^^ 09/22 14:54
5F：推 soom:其实我之前遇到问题就会换一管enzyme(机率真的非常小) 09/22 15:12
6F：推 soom:基本上都会做得出来 不用改protocol/condition 09/22 15:13
7F：推 soom:抱歉无法帮上忙 09/22 15:13
8F：→ aikawa7090:谢谢你唷~感谢^^ 09/22 15:28
9F：推 untilnow:700kb 好大.... 09/22 20:00
10F：推 yaliu:哇～～700kb真的好大喔～～cDNA有这麽大到700kb的喔？ 09/22 20:45
11F：→ mtdas:titin的cDNA有100kb(逃) 09/22 21:33
12F：推 boyo:pfu一ul的价钱可以去吃吃到饱一次 Orz 09/22 21:48
13F：推 nixo:哪里的吃到饱这麽便宜？ 09/22 23:06
14F：推 silverberry:试过提高 dNTP 的浓度就批出来~ 不过後来换用 Phusion 09/22 23:14
15F：→ silverberry:就没遇过这个问题了~ 09/22 23:15
16F：推 tsubasawolfy:pfu有这麽贵-口-? 09/22 23:19
17F：推 wensing:禾鑫生技 pfu 超便宜又很好用！ 09/23 02:15
18F：推 sGoat:pfu的condition与Taq的不太相同,建议你看一下pfu的使用说明 09/23 11:11
19F：→ aikawa7090:阿...打错...是700bp(囧) 09/24 17:21