作者ad1980 (minc)
看板Biotech
標題[問題] 關於 Yeast two-hybrid
時間Sat Sep 20 10:06:01 2008
Y2H 到後面 confirm interaction 的時候，
可以做 x-gal filter lift assay，
就是把 yeast 轉到 filter paper 上，
然後丟到 liquid N2 裡面幾次破細胞，
之後加 Z buffer 放在 30C O/N，檢視有沒有變藍色。
想問大家有沒有試過做 liquid 的。
因為我要 screen 大量的 colonies，
所以會用 96-well tray 做 mating，
想說之後如果 spin down, 抽掉 medium，
把整個 tray 丟到 -80C 來回幾次破細胞，
然後直接在 well 裡面加 Z buffer，
看看有沒有變藍色，這樣可行嘛？
(這樣細胞破的了、會變藍色嘛？)
不知道有沒有人試過這樣做....
Clontech 上有 OPNG 還是 b-gal/PNP 的測法，可是有點麻煩，
我們好像沒有可以放 96-well tray 測色度的儀器，
所以想看看直接把 lift assay 改成在 tray 做可不可行...@@...
PS. 照理說應該是先用 -Leu/Trp/His/Ade condition 看
能不能長，但因為我做的不是單純的 library screen，
裡面包括要做 mutant screen，要找跟 A 沒 interact，
但跟 B 或 C or both 有 interact 的 mutants，
整個下來工程有點浩大，所以看看有沒有省時又簡單的方法...
先謝謝了~
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※ 編輯: ad1980 來自: 67.193.246.118 (09/20 10:08)
1F：推 crement:沒有這樣做過，但是聽起來頗合理的！ 09/20 13:45
2F：→ crement:不過你可以先挑有與B C結合的CLONE，在去試A吧？！ 09/20 13:46