作者ad1980 (minc)
看板Biotech
标题[问题] 关於 Yeast two-hybrid
时间Sat Sep 20 10:06:01 2008
Y2H 到後面 confirm interaction 的时候，
可以做 x-gal filter lift assay，
就是把 yeast 转到 filter paper 上，
然後丢到 liquid N2 里面几次破细胞，
之後加 Z buffer 放在 30C O/N，检视有没有变蓝色。
想问大家有没有试过做 liquid 的。
因为我要 screen 大量的 colonies，
所以会用 96-well tray 做 mating，
想说之後如果 spin down, 抽掉 medium，
把整个 tray 丢到 -80C 来回几次破细胞，
然後直接在 well 里面加 Z buffer，
看看有没有变蓝色，这样可行嘛？
(这样细胞破的了、会变蓝色嘛？)
不知道有没有人试过这样做....
Clontech 上有 OPNG 还是 b-gal/PNP 的测法，可是有点麻烦，
我们好像没有可以放 96-well tray 测色度的仪器，
所以想看看直接把 lift assay 改成在 tray 做可不可行...@@...
PS. 照理说应该是先用 -Leu/Trp/His/Ade condition 看
能不能长，但因为我做的不是单纯的 library screen，
里面包括要做 mutant screen，要找跟 A 没 interact，
但跟 B 或 C or both 有 interact 的 mutants，
整个下来工程有点浩大，所以看看有没有省时又简单的方法...
先谢谢了~
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※ 编辑: ad1980 来自: 67.193.246.118 (09/20 10:08)
1F：推 crement:没有这样做过，但是听起来颇合理的！ 09/20 13:45
2F：→ crement:不过你可以先挑有与B C结合的CLONE，在去试A吧？！ 09/20 13:46