作者Crow22312 (烏鴉)
看板Biotech
標題Re: [求救] paper 內文解析 ??
時間Wed Sep 17 04:10:16 2008
※ 引述《wei19850210 (we~we)》之銘言：
: 標題: [求救] paper
: 時間: Tue Sep 16 16:12:04 2008
:
:
:
: 在看paper的時候遇到個小問題
: 或許這問題很笨 不過我真的是不了解 = =" ......
:
: 內文如下:
: PCR reactions were facilitated by 20 pmol of 5' end PCR primer
: containing sfiI A site (5'AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGGCCATTACGGCCGGG-
: 3'), and 20 pmol of CDSIII/3' end polyT PCR primers containing sfiI B site [5'-
: ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG-d(T)30N-1N-3'].
:
: 想請問的是?
: 內文提到的 "20 pmol" 是指 primer 的濃度? 還是所使用的量?
:
:
: --
:
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
: ◆ From: 192.192.90.35
: 推 sGoat:reaction裡的濃度 09/16 16:35
: → qqo8855436:final濃度 pico mole~ 09/16 16:37
: 推 sisyphus: final 量 p mole~ M是濃度 mole是分子數 09/16 17:26
: 推 sGoat:對,應該是量XDXD感謝樓上糾正 09/16 17:31
: → sisyphus:通常是10mM in 20入, 沒記錯的話這樣應該是20 pmol 09/16 17:33
: 推 sisyphus:剛才發現搞錯 2 入, primer不會加20入這麼多@@ 09/16 18:54
: 推 sGoat:XDXD樓上也鬼打牆嗎XD 09/16 23:01
: 推 blence:上面錯誤還是存在,primer濃度10mM取2λ,總量絕對不是20pmol 09/16 23:39
哈哈, 這好像不是普通的 PCR primer, 不是那種 1 mer 10~19 元的,
訂回來回溶成 100 mM 然後在稀釋成 10 mM 的.. NO, 不是 ._.
小烏鴉半夜睡不著稍微查了一下..
那篇 paper 應該是..
http://www.biomedcentral.com/1471-2164/8/145 這篇的 ._.
他們用的是 clontech 的 kit -> SMART cDNA Library Construction Kit
有興趣的可以在這邊找到他的 pdf:
http://www.clontech.com/products/detail.asp?product_id=10403&tabno=3
其中 SMART cDNA Library Construction Kit User Manual PT3000-1
這個應該是完整的使用者說明手冊吧 ._.
手冊裡面建議的使用量是 2 ul (P20), kit 內涵的東西是 12 uM (P9)
也就是說.. 2 ul * 12 uM = 2 ul * 12 pmol/ul => 24 pmol
( 因為 1 pmol/ul = 1 uM )
可能是做這篇 paper 家的人省, 所以沒有用到 24 pmol,
或者他沒注意到, 以為 kit 附的是 10 uM 的東西...
總之.. 應該是 primer 的總使用量為 20 pmol, 20 pmol 不是濃度的一種.
以上.. 如果還有錯.. 請鞭小力一點 <(_ _)>
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 125.230.85.191
※ 編輯: Crow22312 來自: 125.230.85.191 (09/17 04:10)
1F：推 wei19850210:這位大大真厲害 這是LD PCR 只是看過產品說明書還是 09/17 09:54
2F：→ wei19850210:有困惑 才上來發問 真是感謝您的熱心幫助!!! 09/17 09:54
3F：推 sisyphus:推你一個認真 @@ 09/17 12:04
4F：→ sisyphus:不過我覺得是他們搞錯濃度了XD~~省那4pmole沒差吧 09/17 12:05
5F：推 chvkimo:反正先照他們的資料做,省不省是另一回事 09/17 12:25
6F：→ Crow22312:省那些或許一盒可以多做五個反應也說不定.. XD 09/17 16:08