作者Crow22312 (乌鸦)
看板Biotech
标题Re: [求救] paper 内文解析 ??
时间Wed Sep 17 04:10:16 2008
※ 引述《wei19850210 (we~we)》之铭言：
: 标题: [求救] paper
: 时间: Tue Sep 16 16:12:04 2008
:
:
:
: 在看paper的时候遇到个小问题
: 或许这问题很笨 不过我真的是不了解 = =" ......
:
: 内文如下:
: PCR reactions were facilitated by 20 pmol of 5' end PCR primer
: containing sfiI A site (5'AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGGCCATTACGGCCGGG-
: 3'), and 20 pmol of CDSIII/3' end polyT PCR primers containing sfiI B site [5'-
: ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG-d(T)30N-1N-3'].
:
: 想请问的是?
: 内文提到的 "20 pmol" 是指 primer 的浓度? 还是所使用的量?
:
:
: --
:
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
: ◆ From: 192.192.90.35
: 推 sGoat:reaction里的浓度 09/16 16:35
: → qqo8855436:final浓度 pico mole~ 09/16 16:37
: 推 sisyphus: final 量 p mole~ M是浓度 mole是分子数 09/16 17:26
: 推 sGoat:对,应该是量XDXD感谢楼上纠正 09/16 17:31
: → sisyphus:通常是10mM in 20入, 没记错的话这样应该是20 pmol 09/16 17:33
: 推 sisyphus:刚才发现搞错 2 入, primer不会加20入这麽多@@ 09/16 18:54
: 推 sGoat:XDXD楼上也鬼打墙吗XD 09/16 23:01
: 推 blence:上面错误还是存在,primer浓度10mM取2λ,总量绝对不是20pmol 09/16 23:39
哈哈, 这好像不是普通的 PCR primer, 不是那种 1 mer 10~19 元的,
订回来回溶成 100 mM 然後在稀释成 10 mM 的.. NO, 不是 ._.
小乌鸦半夜睡不着稍微查了一下..
那篇 paper 应该是..
http://www.biomedcentral.com/1471-2164/8/145 这篇的 ._.
他们用的是 clontech 的 kit -> SMART cDNA Library Construction Kit
有兴趣的可以在这边找到他的 pdf:
http://www.clontech.com/products/detail.asp?product_id=10403&tabno=3
其中 SMART cDNA Library Construction Kit User Manual PT3000-1
这个应该是完整的使用者说明手册吧 ._.
手册里面建议的使用量是 2 ul (P20), kit 内涵的东西是 12 uM (P9)
也就是说.. 2 ul * 12 uM = 2 ul * 12 pmol/ul => 24 pmol
( 因为 1 pmol/ul = 1 uM )
可能是做这篇 paper 家的人省, 所以没有用到 24 pmol,
或者他没注意到, 以为 kit 附的是 10 uM 的东西...
总之.. 应该是 primer 的总使用量为 20 pmol, 20 pmol 不是浓度的一种.
以上.. 如果还有错.. 请鞭小力一点 <(_ _)>
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 125.230.85.191
※ 编辑: Crow22312 来自: 125.230.85.191 (09/17 04:10)
1F：推 wei19850210:这位大大真厉害 这是LD PCR 只是看过产品说明书还是 09/17 09:54
2F：→ wei19850210:有困惑 才上来发问 真是感谢您的热心帮助!!! 09/17 09:54
3F：推 sisyphus:推你一个认真 @@ 09/17 12:04
4F：→ sisyphus:不过我觉得是他们搞错浓度了XD~~省那4pmole没差吧 09/17 12:05
5F：推 chvkimo:反正先照他们的资料做,省不省是另一回事 09/17 12:25
6F：→ Crow22312:省那些或许一盒可以多做五个反应也说不定.. XD 09/17 16:08