※ 引述《hsin1106 (過於喧囂的孤獨)》之銘言： : 最近剛進實驗室開始做實驗 : 在抽DNA跑agarose gel時碰到了幾個問題 : 1.我的gel照UV的時候 頂端會整個偏白色 : 比較上面的band會被蓋過去 不容易判讀 前面推文已經說過改內染 我們家是習慣外染 也比較不會汙染電泳槽 : 2.用BamH和NdeI切我的plasmid時 : 我的比例是 兩種酵素 各加1μl : DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer : DNA量比較多的話就等比例增加 : 之後再37度下反應兩個小時 : 可是跑完電泳 甚麼都看不到 : (marker跟未切拿來當control的都有band) 我習慣酵素的量不超過總體積的十分之一 因為裡面有含甘油 太多可能會影響作用 而且你的DNA量也不多 不需要加那麼多的酵素 挺浪費的 : 3.我的plasmid 是pET-15b : 通常在菌液OD=1.5上下時用VIOGENE的kit抽 : 抽出來的DNA稀釋10倍測260nm大概都在0.03~0.05之間 : 這樣的量是不是偏少?? 是的話 有哪些可能會影響?? 我之前在作蛋白表現前使用pET-30a當載體 那時要先確定質體是OK的 所以我把質體送入DH5a菌種複製 發現抽出的質體DNA量很低 幾乎電泳圖上快看不見了 只有很淡的band 後來轉到BL21菌種後就沒問題了 所以轉菌的菌種適不適合你的質體也會有影響 我看你也是用pET 那你是轉到甚麼菌種呢? 你的膠圖也許要看仔細一點 搞不好其實有band 只是你沒注意到 : 麻煩板上的各位 提供可能的原因 : 或者有哪些資料可以參考的 : 讓我可以試著排除問題 : 不然實驗一整個沒辦法繼續下去 : 先謝謝各位了 --

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