※ 引述《hsin1106 (过於喧嚣的孤独)》之铭言： : 最近刚进实验室开始做实验 : 在抽DNA跑agarose gel时碰到了几个问题 : 1.我的gel照UV的时候 顶端会整个偏白色 : 比较上面的band会被盖过去 不容易判读 前面推文已经说过改内染 我们家是习惯外染 也比较不会污染电泳槽 : 2.用BamH和NdeI切我的plasmid时 : 我的比例是 两种酵素 各加1μl : DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer : DNA量比较多的话就等比例增加 : 之後再37度下反应两个小时 : 可是跑完电泳 甚麽都看不到 : (marker跟未切拿来当control的都有band) 我习惯酵素的量不超过总体积的十分之一 因为里面有含甘油 太多可能会影响作用 而且你的DNA量也不多 不需要加那麽多的酵素 挺浪费的 : 3.我的plasmid 是pET-15b : 通常在菌液OD=1.5上下时用VIOGENE的kit抽 : 抽出来的DNA稀释10倍测260nm大概都在0.03~0.05之间 : 这样的量是不是偏少?? 是的话 有哪些可能会影响?? 我之前在作蛋白表现前使用pET-30a当载体 那时要先确定质体是OK的 所以我把质体送入DH5a菌种复制 发现抽出的质体DNA量很低 几乎电泳图上快看不见了 只有很淡的band 後来转到BL21菌种後就没问题了 所以转菌的菌种适不适合你的质体也会有影响 我看你也是用pET 那你是转到甚麽菌种呢? 你的胶图也许要看仔细一点 搞不好其实有band 只是你没注意到 : 麻烦板上的各位 提供可能的原因 : 或者有哪些资料可以参考的 : 让我可以试着排除问题 : 不然实验一整个没办法继续下去 : 先谢谢各位了 --

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