作者jsi (jsi)
看板Biotech
標題[求救] ECL作用第二次 壓片完全空白
時間Thu Sep 11 22:12:19 2008
根據自己過去使用Amersham ECL的經驗
PVDF membrane在第一次以ECL作用之後去壓片，
當訊號隨時間變弱，再用ECL第二次作用就可以再繼續進行壓片。
現在的實驗室，使用的ECL是已經分裝完全不知來源的ECL。
今天實驗發生了第二次使用ECL作用無效的情況。
我的蛋白質來自小鼠組織，相同sample使用兩種一抗blot
(其一) 1*Ab:rat anti humanXXX 1:100 (抗體帶有PE，因為目前手上只有這支)
2*Ab:goat anti rat IgG HRP 1:5000
第一次作用後壓片，背景黑但不均勻，
有不規則的明亮大區域，看起來不像band的反白，會是二抗太濃嗎?
當我再次使用ECL作第二次反應，壓片結果卻是完全空白，
連membrane形狀都看不到。
(其二) 1*Ab:mouse anti GAPDH 1:40000
2*Ab:goat anti mouse IgG HRP 1:10000
第一次作用後壓片，有明顯訊號。
第二次作用訊號只剩下三條原本最明顯的band。
不知道版上的朋友們是否遇過這樣的情況？
可能是跟不同廠商生產的ECL有關嗎？
一抗上帶有PE會影響壓片結果嗎?
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◆ From: 61.62.20.55
1F：推 yuasa:我以前用millipore的也可以再沾第二次但台廠的就不行= = 09/11 22:54
2F：推 aceliang:我用millipore也可以兩次，但是membrane會燒焦。 09/12 11:03