作者jsi (jsi)
看板Biotech
标题[求救] ECL作用第二次 压片完全空白
时间Thu Sep 11 22:12:19 2008
根据自己过去使用Amersham ECL的经验
PVDF membrane在第一次以ECL作用之後去压片，
当讯号随时间变弱，再用ECL第二次作用就可以再继续进行压片。
现在的实验室，使用的ECL是已经分装完全不知来源的ECL。
今天实验发生了第二次使用ECL作用无效的情况。
我的蛋白质来自小鼠组织，相同sample使用两种一抗blot
(其一) 1*Ab:rat anti humanXXX 1:100 (抗体带有PE，因为目前手上只有这支)
2*Ab:goat anti rat IgG HRP 1:5000
第一次作用後压片，背景黑但不均匀，
有不规则的明亮大区域，看起来不像band的反白，会是二抗太浓吗?
当我再次使用ECL作第二次反应，压片结果却是完全空白，
连membrane形状都看不到。
(其二) 1*Ab:mouse anti GAPDH 1:40000
2*Ab:goat anti mouse IgG HRP 1:10000
第一次作用後压片，有明显讯号。
第二次作用讯号只剩下三条原本最明显的band。
不知道版上的朋友们是否遇过这样的情况？
可能是跟不同厂商生产的ECL有关吗？
一抗上带有PE会影响压片结果吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.20.55
1F：推 yuasa:我以前用millipore的也可以再沾第二次但台厂的就不行= = 09/11 22:54
2F：推 aceliang:我用millipore也可以两次，但是membrane会烧焦。 09/12 11:03