作者yaliu (雅)
看板Biotech
標題Re: [求救] 抽DNA跟跑電泳的問題
時間Thu Sep 11 19:14:55 2008
※ 引述《hsin1106 (過於喧囂的孤獨)》之銘言：
: 最近剛進實驗室開始做實驗
: 在抽DNA跑agarose gel時碰到了幾個問題
: 1.我的gel照UV的時候 頂端會整個偏白色
: 比較上面的band會被蓋過去 不容易判讀
會不會buffer太髒，或者gel配太久了？？
如果片段太大可以降低agarose ％數
: 2.用BamH和NdeI切我的plasmid時
: 我的比例是 兩種酵素 各加1μl
: DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
: DNA量比較多的話就等比例增加
: 之後再37度下反應兩個小時
: 可是跑完電泳 甚麼都看不到
: (marker跟未切拿來當control的都有band)
各loading的量？
未切的和已切的各loading多少？
: 3.我的plasmid 是pET-15b
: 通常在菌液OD=1.5上下時用VIOGENE的kit抽
: 抽出來的DNA稀釋10倍測260nm大概都在0.03~0.05之間
: 這樣的量是不是偏少?? 是的話 有哪些可能會影響??
濃度應該用核酸測定儀測吧
不然可以對照marker的量
記憶上以前測過1mL的菌液萃取，好像頂多0.6~0.9 ug/ul吧
好像很難超過 1ug/ul (不曉得有沒有記錯.....)
我是用kit抽的
還有plasmid的量跟copy number應該有關吧
: 麻煩板上的各位 提供可能的原因
: 或者有哪些資料可以參考的
: 讓我可以試著排除問題
: 不然實驗一整個沒辦法繼續下去
: 先謝謝各位了
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◆ From: 118.161.185.222
1F：推 blence:1mL菌液有多少濃度取決溶於多少體積,你這樣說會沒人看得懂 09/11 23:36
2F：→ yaliu:喔 elution體積約35~50ul 09/12 00:18
3F：推 blence:你一定標錯了,1ml不可能抽到~30ug的plasmid,約3ug才差不多 09/12 00:43
4F：→ blence:你可找一些資料看看,1ml菌液,high copy約有2~7ug的plasmid 09/12 00:45