作者yaliu (雅)
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽DNA跟跑电泳的问题
时间Thu Sep 11 19:14:55 2008
※ 引述《hsin1106 (过於喧嚣的孤独)》之铭言：
: 最近刚进实验室开始做实验
: 在抽DNA跑agarose gel时碰到了几个问题
: 1.我的gel照UV的时候 顶端会整个偏白色
: 比较上面的band会被盖过去 不容易判读
会不会buffer太脏，或者gel配太久了？？
如果片段太大可以降低agarose ％数
: 2.用BamH和NdeI切我的plasmid时
: 我的比例是 两种酵素 各加1μl
: DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
: DNA量比较多的话就等比例增加
: 之後再37度下反应两个小时
: 可是跑完电泳 甚麽都看不到
: (marker跟未切拿来当control的都有band)
各loading的量？
未切的和已切的各loading多少？
: 3.我的plasmid 是pET-15b
: 通常在菌液OD=1.5上下时用VIOGENE的kit抽
: 抽出来的DNA稀释10倍测260nm大概都在0.03~0.05之间
: 这样的量是不是偏少?? 是的话 有哪些可能会影响??
浓度应该用核酸测定仪测吧
不然可以对照marker的量
记忆上以前测过1mL的菌液萃取，好像顶多0.6~0.9 ug/ul吧
好像很难超过 1ug/ul (不晓得有没有记错.....)
我是用kit抽的
还有plasmid的量跟copy number应该有关吧
: 麻烦板上的各位 提供可能的原因
: 或者有哪些资料可以参考的
: 让我可以试着排除问题
: 不然实验一整个没办法继续下去
: 先谢谢各位了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.161.185.222
1F：推 blence:1mL菌液有多少浓度取决溶於多少体积,你这样说会没人看得懂 09/11 23:36
2F：→ yaliu:喔 elution体积约35~50ul 09/12 00:18
3F：推 blence:你一定标错了,1ml不可能抽到~30ug的plasmid,约3ug才差不多 09/12 00:43
4F：→ blence:你可找一些资料看看,1ml菌液,high copy约有2~7ug的plasmid 09/12 00:45