作者hsin1106 (過於喧囂的孤獨)
看板Biotech
標題[求救] DNA電泳的問題
時間Thu Sep 11 18:56:02 2008
最近剛進實驗室開始做實驗
在抽DNA跑agarose gel時碰到了幾個問題
1.我的gel照UV的時候 頂端會整個偏白色
比較上面的band會被蓋過去 不容易判讀
2.用BamH和NdeI切我的plasmid時
我的比例是 兩種酵素 各加1μl
DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
DNA量比較多的話就等比例增加
之後再37度下反應兩個小時
可是跑完電泳 甚麼都看不到
(marker跟未切拿來當control的都有band)
3.我的plasmid 是pET-15b
通常在菌液OD=1.5上下時用VIOGENE的kit抽
抽出來的DNA稀釋10倍測260nm大概都在0.03~0.05之間
這樣的量是不是偏少?? 是的話 有哪些可能會影響??
麻煩板上的各位 提供可能的原因
或者有哪些資料可以參考的
讓我可以試著排除問題
不然實驗一整個沒辦法繼續下去
先謝謝各位了
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◆ From: 163.15.177.142
※ 編輯: hsin1106 來自: 163.15.177.142 (09/11 18:56)
1F：推 dankai:你的EtBr是內加在膠裡面的嗎~如果是改成外染的!那個上端偏 09/11 19:59
2F：→ dankai:白的情形會改善掉~~ 09/11 20:00
3F：→ hsin1106:我的是內染的 下次試試看 09/11 20:05
4F：推 dankai:之前有討論過這一類問題~~所以你可以試爬文看看!! 09/11 20:07
5F：推 sisyphus:1. 內染的好像很容易這樣 沒被法外染就退一下色吧 09/11 20:17
6F：→ sisyphus:2 切過頭?你有protocol建議的量或是有其他人的condition? 09/11 20:18
7F：→ sisyphus:3. 應該算滿少的吧@@!你的總體積是多少? 09/11 20:19
8F：→ hsin1106:1.請問退染的方式是? 09/11 20:34
9F：→ hsin1106:2.用的量是之前學長姐做過後給的 09/11 20:38
10F：→ hsin1106:有可能是因為我抽到的量比他們少 所以切過頭嗎？？ 09/11 20:38
11F：→ hsin1106:3.抽完後的總體積是50μl，我通常是取2ml的菌液 09/11 20:40
12F：推 yaliu:退染泡水就好了 直接加EtBr的確也比較容易上面白白的 09/11 23:12
13F：推 tsubasawolfy:第一個情形也有可能是EtBr放太久了XD 我們也是用內染 09/12 08:58
14F：→ tsubasawolfy:之前那一瓶N年買的就會這樣 買新的就不再出現 09/12 08:58
15F：推 feng760804:在倒進製膠盒時記得用tip稍微"拉"一下看看 09/13 23:45