作者hsin1106 (过於喧嚣的孤独)
看板Biotech
标题[求救] DNA电泳的问题
时间Thu Sep 11 18:56:02 2008
最近刚进实验室开始做实验
在抽DNA跑agarose gel时碰到了几个问题
1.我的gel照UV的时候 顶端会整个偏白色
比较上面的band会被盖过去 不容易判读
2.用BamH和NdeI切我的plasmid时
我的比例是 两种酵素 各加1μl
DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
DNA量比较多的话就等比例增加
之後再37度下反应两个小时
可是跑完电泳 甚麽都看不到
(marker跟未切拿来当control的都有band)
3.我的plasmid 是pET-15b
通常在菌液OD=1.5上下时用VIOGENE的kit抽
抽出来的DNA稀释10倍测260nm大概都在0.03~0.05之间
这样的量是不是偏少?? 是的话 有哪些可能会影响??
麻烦板上的各位 提供可能的原因
或者有哪些资料可以参考的
让我可以试着排除问题
不然实验一整个没办法继续下去
先谢谢各位了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.177.142
※ 编辑: hsin1106 来自: 163.15.177.142 (09/11 18:56)
1F：推 dankai:你的EtBr是内加在胶里面的吗~如果是改成外染的!那个上端偏 09/11 19:59
2F：→ dankai:白的情形会改善掉~~ 09/11 20:00
3F：→ hsin1106:我的是内染的 下次试试看 09/11 20:05
4F：推 dankai:之前有讨论过这一类问题~~所以你可以试爬文看看!! 09/11 20:07
5F：推 sisyphus:1. 内染的好像很容易这样 没被法外染就退一下色吧 09/11 20:17
6F：→ sisyphus:2 切过头?你有protocol建议的量或是有其他人的condition? 09/11 20:18
7F：→ sisyphus:3. 应该算满少的吧@@!你的总体积是多少? 09/11 20:19
8F：→ hsin1106:1.请问退染的方式是? 09/11 20:34
9F：→ hsin1106:2.用的量是之前学长姐做过後给的 09/11 20:38
10F：→ hsin1106:有可能是因为我抽到的量比他们少 所以切过头吗？？ 09/11 20:38
11F：→ hsin1106:3.抽完後的总体积是50μl，我通常是取2ml的菌液 09/11 20:40
12F：推 yaliu:退染泡水就好了 直接加EtBr的确也比较容易上面白白的 09/11 23:12
13F：推 tsubasawolfy:第一个情形也有可能是EtBr放太久了XD 我们也是用内染 09/12 08:58
14F：→ tsubasawolfy:之前那一瓶N年买的就会这样 买新的就不再出现 09/12 08:58
15F：推 feng760804:在倒进制胶盒时记得用tip稍微"拉"一下看看 09/13 23:45