作者suglaz (小微)
看板Biotech
標題Re: [求救] 染IF的時候non-specific binding很嚴重
時間Tue Sep 9 14:35:19 2008
※ 引述《allisa (小晴)》之銘言：
: 我的tissue是用冷切 用1%bsa blocking 1hr
: primary Ab 1:500 overnight
: 用pbst wash 10 min x5
: secondary Ab 1:200 2hr
: 用pbst wash 10 min x5
: 但是染出來該亮的不亮 不該亮的非常亮
: 比如說 只會在核表現的 就只有核不亮 其他地方 連細胞質都亮晶晶
: 請問我應該修改哪個步驟呢?? 請大家給點建議吧
: 謝謝 :)
我的步驟跟你有點不同~~你試試看吧`我染都很OK唷~
TISSUE冷切~先加點冰的PBS浸潤一下
4%PA 30mins
PBS WASH X3
3% BSA 30mins
PBS wash X3
一抗(1:200) O/N 放冰箱
PBS WASH X3
二抗(1:200) 1hr RT
PBS WASH X3
我的WASH都是用pippet在旁邊吸放WASH~
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