作者suglaz (小微)
看板Biotech
标题Re: [求救] 染IF的时候non-specific binding很严重
时间Tue Sep 9 14:35:19 2008
※ 引述《allisa (小晴)》之铭言：
: 我的tissue是用冷切 用1%bsa blocking 1hr
: primary Ab 1:500 overnight
: 用pbst wash 10 min x5
: secondary Ab 1:200 2hr
: 用pbst wash 10 min x5
: 但是染出来该亮的不亮 不该亮的非常亮
: 比如说 只会在核表现的 就只有核不亮 其他地方 连细胞质都亮晶晶
: 请问我应该修改哪个步骤呢?? 请大家给点建议吧
: 谢谢 :)
我的步骤跟你有点不同~~你试试看吧`我染都很OK唷~
TISSUE冷切~先加点冰的PBS浸润一下
4%PA 30mins
PBS WASH X3
3% BSA 30mins
PBS wash X3
一抗(1:200) O/N 放冰箱
PBS WASH X3
二抗(1:200) 1hr RT
PBS WASH X3
我的WASH都是用pippet在旁边吸放WASH~
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