作者honny7410 (年光)
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標題[求救] pine tree 抽RNA時，出現無法分層的狀況
時間Mon Sep 8 22:13:55 2008
如題
抽RNA的對象，是阿拉伯芥的葉子混合果莢、種子及花 共 0.1g
為了怕多醣干擾的問題，所以用了pine tree的方法
過程是：液態氮冷凍--->用extraction buffer + beta mercaptoethanol混合磨碎組織
--->攝氏65度加熱五分鐘---->加24:1 的chloroform:isoamyl alcohol(CI)--->離心，吸
上清液，並重複加入CI並離心的步驟直到介面澄清
在第一次加入CI並離心後，上下兩層有明顯的分界，其間隔著很厚的一層植物的殘渣及
雜質
但在第二次加入CI再離心後，分界就不明顯了，而且離心更久也無用。靜置一段時間後
可看到模糊的分界，但是一離心又不見了
原本想說會不會是CI有問題導致無法分層，所以分別用了清水和extraction buffer加
CI，結果都有明顯的分界
想問問板上的各位大大，是否曾在做pine tree 時遇到相同的問題呢？到底是為什麼
呢？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.42
1F：推 dankai:抽RNA的CI應該是用49:1~ 09/08 23:03
2F：→ dankai:我也是用pine tree的方法抽果實~CI是用49:1 09/08 23:04
3F：→ dankai:這是我們修正過CI後的結果~~呵...剛剛忘了說!! 09/08 23:08
4F：→ honny7410:感謝d大的回答！ 我會試試看的 09/09 15:33
5F：→ honny7410:只是,想再問一下,為何是調整CI呢? 09/09 16:39
6F：推 davideason:buffer VS sample至少要3:1 至少喔~! 09/10 08:47