作者honny7410 (年光)
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标题[求救] pine tree 抽RNA时，出现无法分层的状况
时间Mon Sep 8 22:13:55 2008
如题
抽RNA的对象，是阿拉伯芥的叶子混合果荚、种子及花 共 0.1g
为了怕多醣干扰的问题，所以用了pine tree的方法
过程是：液态氮冷冻--->用extraction buffer + beta mercaptoethanol混合磨碎组织
--->摄氏65度加热五分钟---->加24:1 的chloroform:isoamyl alcohol(CI)--->离心，吸
上清液，并重复加入CI并离心的步骤直到介面澄清
在第一次加入CI并离心後，上下两层有明显的分界，其间隔着很厚的一层植物的残渣及
杂质
但在第二次加入CI再离心後，分界就不明显了，而且离心更久也无用。静置一段时间後
可看到模糊的分界，但是一离心又不见了
原本想说会不会是CI有问题导致无法分层，所以分别用了清水和extraction buffer加
CI，结果都有明显的分界
想问问板上的各位大大，是否曾在做pine tree 时遇到相同的问题呢？到底是为什麽
呢？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.42
1F：推 dankai:抽RNA的CI应该是用49:1~ 09/08 23:03
2F：→ dankai:我也是用pine tree的方法抽果实~CI是用49:1 09/08 23:04
3F：→ dankai:这是我们修正过CI後的结果~~呵...刚刚忘了说!! 09/08 23:08
4F：→ honny7410:感谢d大的回答！ 我会试试看的 09/09 15:33
5F：→ honny7410:只是,想再问一下,为何是调整CI呢? 09/09 16:39
6F：推 davideason:buffer VS sample至少要3:1 至少喔~! 09/10 08:47