※ 引述《kakaman (日子過的真快阿)》之銘言： : 有人做過protein dot blot嗎? : 就是把PVDF活化後 放在一個像96孔盤的裝置上 : 藉由抽氣 將蛋白質轉印在PVDF上 : 接著就像western一樣了 : 我load的蛋白是total protein : 我知道除非抗體很好 不然用這方法實在不怎麼恰當 : 但是現在遇到一個問題是 : 我的control只有load RIPA buffer 居然也有點 還超黑... control有抓到是一定的阿 重點是你想看的東西有沒有出來吧 況且control是一定會dilute的 反正dot blot都會點很多點了 不如就做dilute的gradient 比較擔心的是 你純化的蛋白沒轉出來 反而只有control很黑 如果只是想讓圖漂亮一點的話 就分兩張pvdf紙吧 了不起比較浪費抗體 如果你們家有錢的話 科科 一張做control的gradient(還可以順便抓時間) 另一張看你想要抓的東西有沒有被純化 另外就是看你是怎麼染的 我之前有用過cy3 & cy5來染 感覺效果還不錯 有機器 有錢的話 可以考慮看看 : 而且常常有些會點暈開 一個點出錯 就要重來 點和點之間 會自己留距離阿 會遇到暈開 是因為濃度太高了 如果濃度很低還是暈開 就是抗體有問題(代表沒專一性) 另外我還有遇過 安加奶粉擺太九 做出來也是很怪 : 想問 板上有人有做這個的經驗嗎 : 可以給我一點意見嗎? 希望有幫到你的忙 --

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