※ 引述《kakaman (日子过的真快阿)》之铭言： : 有人做过protein dot blot吗? : 就是把PVDF活化後 放在一个像96孔盘的装置上 : 藉由抽气 将蛋白质转印在PVDF上 : 接着就像western一样了 : 我load的蛋白是total protein : 我知道除非抗体很好 不然用这方法实在不怎麽恰当 : 但是现在遇到一个问题是 : 我的control只有load RIPA buffer 居然也有点 还超黑... control有抓到是一定的阿 重点是你想看的东西有没有出来吧 况且control是一定会dilute的 反正dot blot都会点很多点了 不如就做dilute的gradient 比较担心的是 你纯化的蛋白没转出来 反而只有control很黑 如果只是想让图漂亮一点的话 就分两张pvdf纸吧 了不起比较浪费抗体 如果你们家有钱的话 科科 一张做control的gradient(还可以顺便抓时间) 另一张看你想要抓的东西有没有被纯化 另外就是看你是怎麽染的 我之前有用过cy3 & cy5来染 感觉效果还不错 有机器 有钱的话 可以考虑看看 : 而且常常有些会点晕开 一个点出错 就要重来 点和点之间 会自己留距离阿 会遇到晕开 是因为浓度太高了 如果浓度很低还是晕开 就是抗体有问题(代表没专一性) 另外我还有遇过 安加奶粉摆太九 做出来也是很怪 : 想问 板上有人有做这个的经验吗 : 可以给我一点意见吗? 希望有帮到你的忙 --

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