作者soceress (soceress)
看板Biotech
標題[求救] western blot染出的band不見!
時間Thu Sep 4 00:29:26 2008
我的第一個lane是marker,第二個lane開始是sample
在所有過程都over後以ECL呈色
常常會在70KD的位子,第二個lane的band不見了
marker和第三個以後的lane 70kd 的band都還在
看起來都很正常
向別人家借過硬體部份,結果還是一樣
之前做都不會這樣...
那個位子是確定要染出東西來的...
第二條lane的其它分子量部份..比如說 actin,或是再小的protein
都有正常出現
請問有沒有哪位知道這是哪裡出了問題呢??
為什麼就第二條lane,70KD的band不見了......????
感謝回答!!
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◆ From: 118.165.221.71
1F：推 micocat:這是單次實驗的結果嗎 同一隻sample再跑一次看看 09/04 14:09
2F：→ micocat:不知道你的sample是什麼 根本無從判斷 09/04 14:10
3F：→ REIDO:ECL沒泡到？ 09/04 14:11
4F：→ soceress:同一批sample跑過5次,不同的sample也跑過超過3次, 09/04 16:09
5F：→ soceress:結果有1次-2次是有染到,ECL也很確定足量.. 09/04 16:11
6F：→ soceress:sample:rat spinal cord 09/04 16:12
7F：推 suming417:壓片時肉眼是否可看見膜在發亮，你第二條lane是否要比눠 09/05 02:52
8F：→ suming417:第三條lane強? 09/05 02:52
9F：→ soceress:ㄟ..正常的結果第二條本來就會比較弱, 09/05 14:12
10F：→ soceress:所以我不敢說第二條比較弱是因為飄走得比第三條多 09/05 14:14
11F：推 lsalber:預期會出現band的量是否為高含量?有可能是燒掉了 09/06 22:12
12F：→ soceress:和其他幾個lane的sample比起來是相對高量 09/07 14:40
13F：→ soceress:請問"燒掉"是??? (它transfer後都還是冰涼的) 09/07 14:41
14F：推 lsalber:燒掉指的是蛋白含量或抗體量過高使得冷光試劑瞬間被消耗完 09/07 19:30
15F：→ lsalber:通常會出現"反白"的現象,可以看看PVDF是否帶有黃色的沉澱 09/07 19:31
16F：→ lsalber:可以嘗試看看降低1,2抗的濃度 09/07 19:32
17F：→ soceress:正常應是sample 1<2,2略小於3, 所以我想可能不是燒掉了 09/09 11:18
18F：→ soceress:我上次反序loading sample,結果也還是同個位置不見 09/09 11:19
19F：→ soceress:快瘋了…^^|| 09/09 11:20