作者soceress (soceress)
看板Biotech
标题[求救] western blot染出的band不见!
时间Thu Sep 4 00:29:26 2008
我的第一个lane是marker,第二个lane开始是sample
在所有过程都over後以ECL呈色
常常会在70KD的位子,第二个lane的band不见了
marker和第三个以後的lane 70kd 的band都还在
看起来都很正常
向别人家借过硬体部份,结果还是一样
之前做都不会这样...
那个位子是确定要染出东西来的...
第二条lane的其它分子量部份..比如说 actin,或是再小的protein
都有正常出现
请问有没有哪位知道这是哪里出了问题呢??
为什麽就第二条lane,70KD的band不见了......????
感谢回答!!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.165.221.71
1F：推 micocat:这是单次实验的结果吗 同一只sample再跑一次看看 09/04 14:09
2F：→ micocat:不知道你的sample是什麽 根本无从判断 09/04 14:10
3F：→ REIDO:ECL没泡到？ 09/04 14:11
4F：→ soceress:同一批sample跑过5次,不同的sample也跑过超过3次, 09/04 16:09
5F：→ soceress:结果有1次-2次是有染到,ECL也很确定足量.. 09/04 16:11
6F：→ soceress:sample:rat spinal cord 09/04 16:12
7F：推 suming417:压片时肉眼是否可看见膜在发亮，你第二条lane是否要比눠 09/05 02:52
8F：→ suming417:第三条lane强? 09/05 02:52
9F：→ soceress:ㄟ..正常的结果第二条本来就会比较弱, 09/05 14:12
10F：→ soceress:所以我不敢说第二条比较弱是因为飘走得比第三条多 09/05 14:14
11F：推 lsalber:预期会出现band的量是否为高含量?有可能是烧掉了 09/06 22:12
12F：→ soceress:和其他几个lane的sample比起来是相对高量 09/07 14:40
13F：→ soceress:请问"烧掉"是??? (它transfer後都还是冰凉的) 09/07 14:41
14F：推 lsalber:烧掉指的是蛋白含量或抗体量过高使得冷光试剂瞬间被消耗完 09/07 19:30
15F：→ lsalber:通常会出现"反白"的现象,可以看看PVDF是否带有黄色的沉淀 09/07 19:31
16F：→ lsalber:可以尝试看看降低1,2抗的浓度 09/07 19:32
17F：→ soceress:正常应是sample 1<2,2略小於3, 所以我想可能不是烧掉了 09/09 11:18
18F：→ soceress:我上次反序loading sample,结果也还是同个位置不见 09/09 11:19
19F：→ soceress:快疯了…^^|| 09/09 11:20