作者rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)
看板Biotech
標題[求救] pcr一直失敗?
時間Sat Aug 30 16:55:32 2008
最近我的實驗(定序)不知道怎麼搞的一直失敗
而我也一直找不出原因來---我真的以為我的實驗中邪了!!
怎麼說呢~同樣的primer taq dntp buffer dna 及pcr條件
卻怎麼都跑不出同樣的結果(就在最近這一個月!!在那之前跑膠都很成功)
跑膠後發現我的pcr產物好像卡在load膠的洞口,因為照相出來的結果孔的地方很亮,
看起來就像是一條band!
本來我以為是dna有問題 於是用了別的primer嘗試 但結果很漂亮(是single band)
以為是primer 有問題又重新合成 還是不行!!
麻煩大家指教一下吧~~我已經試了一個月 試到整個人都沒有再做下去的勇氣了!!
感激不盡~
p.s我做的是植物dna的定序
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我並不害怕,是你最終沒有娶我。我是寧願由你來負我,而我無法負你
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◆ From: 211.75.55.226
※ 編輯: rvnkhlnomgtl 來自: 211.75.55.226 (08/30 16:56)
1F：推 onlyone0419:膠的well中有鹽離子，所以DNA下不來，可能是膠放太久 08/31 01:13
2F：→ onlyone0419:跑之前用水沖well，你的膠是多少% ? 08/31 01:14
3F：→ rvnkhlnomgtl:膠沒有問題,因為marker有出來,而且我有放其他primer 08/31 01:29
4F：→ rvnkhlnomgtl:的產物放在同一塊膠一起跑..結果有跑出成功的BAND 08/31 01:30
5F：推 kemp6611:要不要試一下新的polymerase看看~~先跟其他實驗室借一下~ 09/02 01:49
6F：→ kemp6611:有時polymerase放太久~~效率會變差!(時有時無的PCR反應) 09/02 01:51