作者rvnkhlnomgtl (或许天堂也常日落)
看板Biotech
标题[求救] pcr一直失败?
时间Sat Aug 30 16:55:32 2008
最近我的实验(定序)不知道怎麽搞的一直失败
而我也一直找不出原因来---我真的以为我的实验中邪了!!
怎麽说呢~同样的primer taq dntp buffer dna 及pcr条件
却怎麽都跑不出同样的结果(就在最近这一个月!!在那之前跑胶都很成功)
跑胶後发现我的pcr产物好像卡在load胶的洞口,因为照相出来的结果孔的地方很亮,
看起来就像是一条band!
本来我以为是dna有问题 於是用了别的primer尝试 但结果很漂亮(是single band)
以为是primer 有问题又重新合成 还是不行!!
麻烦大家指教一下吧~~我已经试了一个月 试到整个人都没有再做下去的勇气了!!
感激不尽~
p.s我做的是植物dna的定序
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我并不害怕,是你最终没有娶我。我是宁愿由你来负我,而我无法负你
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.55.226
※ 编辑: rvnkhlnomgtl 来自: 211.75.55.226 (08/30 16:56)
1F：推 onlyone0419:胶的well中有盐离子，所以DNA下不来，可能是胶放太久 08/31 01:13
2F：→ onlyone0419:跑之前用水冲well，你的胶是多少% ? 08/31 01:14
3F：→ rvnkhlnomgtl:胶没有问题,因为marker有出来,而且我有放其他primer 08/31 01:29
4F：→ rvnkhlnomgtl:的产物放在同一块胶一起跑..结果有跑出成功的BAND 08/31 01:30
5F：推 kemp6611:要不要试一下新的polymerase看看~~先跟其他实验室借一下~ 09/02 01:49
6F：→ kemp6611:有时polymerase放太久~~效率会变差!(时有时无的PCR反应) 09/02 01:51