作者keukeu (GO PUNK!)
看板Biotech
標題[求救] TA cloning後抽plasmid跑膠是smear>o<
時間Fri Aug 29 08:48:00 2008
我是將1.7~2.3kb 左右的PCR產物作TA cloning
PCR product purify後有取2 ul跑膠check
gel extraction的量是ok的
ligation是用16度 O/N
塗盤長菌也ok (藍白clon都有 白多藍少)
挑菌放大也ok 菌量很夠抽plasmid
我是用v牌kit
抽完plasmid想跑個膠check一下(0.4% agarose)(我的vecter是3.9kb)
結果跑出來大約在6kb處呈現一片smear >______<o
我重新挑菌養菌抽了兩次
一次用elution buffer一次用水
兩次跑膠都這樣
第一次用elution bffer時跑膠唯一有個sample有band的
居然是出現在不是3.9k的位置也不是6k左右的位置
而是2k....=.=
請問...
到底是那兒有問題
嗚嗚...data趕不出來...
clong菜鳥....唉...
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REVOLUTION REVIVAL
UNDER GROUND OF K.H
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.112.102
1F：→ keukeu:實驗室不能上bbs如果有好心人解答 可以寄e mail嗎... 08/29 09:02
3F：推 sGoat:plasmid要切成直線才能跑出確切的大小 08/29 14:23
4F：→ sGoat:如果你沒有用酵素切過的話,我猜2k的那個就是XD 08/29 14:23
5F：推 peggie0903:沒切過的質體呈supercoil跑的位置不一定 08/29 15:14
6F：推 suming417:質體在抽出來後大致會有超螺旋狀、環狀、斷掉的線狀三種 09/03 21:30
7F：→ suming417:但超螺旋通常看不到，環狀就是一大坨在你質體大小以上 09/03 21:32
8F：→ suming417:線狀就會出現在你預測大小的位置，仔細看看應該會有！ 09/03 21:33