作者keukeu (GO PUNK!)
看板Biotech
标题[求救] TA cloning後抽plasmid跑胶是smear>o<
时间Fri Aug 29 08:48:00 2008
我是将1.7~2.3kb 左右的PCR产物作TA cloning
PCR product purify後有取2 ul跑胶check
gel extraction的量是ok的
ligation是用16度 O/N
涂盘长菌也ok (蓝白clon都有 白多蓝少)
挑菌放大也ok 菌量很够抽plasmid
我是用v牌kit
抽完plasmid想跑个胶check一下(0.4% agarose)(我的vecter是3.9kb)
结果跑出来大约在6kb处呈现一片smear >______<o
我重新挑菌养菌抽了两次
一次用elution buffer一次用水
两次跑胶都这样
第一次用elution bffer时跑胶唯一有个sample有band的
居然是出现在不是3.9k的位置也不是6k左右的位置
而是2k....=.=
请问...
到底是那儿有问题
呜呜...data赶不出来...
clong菜鸟....唉...
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REVOLUTION REVIVAL
UNDER GROUND OF K.H
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.112.102
1F：→ keukeu:实验室不能上bbs如果有好心人解答 可以寄e mail吗... 08/29 09:02
3F：推 sGoat:plasmid要切成直线才能跑出确切的大小 08/29 14:23
4F：→ sGoat:如果你没有用酵素切过的话,我猜2k的那个就是XD 08/29 14:23
5F：推 peggie0903:没切过的质体呈supercoil跑的位置不一定 08/29 15:14
6F：推 suming417:质体在抽出来後大致会有超螺旋状、环状、断掉的线状三种 09/03 21:30
7F：→ suming417:但超螺旋通常看不到，环状就是一大坨在你质体大小以上 09/03 21:32
8F：→ suming417:线状就会出现在你预测大小的位置，仔细看看应该会有！ 09/03 21:33