作者catalyst (abc)
看板Biotech
標題[求救] 請問降低背景螢光的固定方法
時間Fri Aug 29 05:10:30 2008
最近在做小鼠腦的切片 切片的厚度是350 micro meter
培養幾天後再染色看螢光表現。螢光是染microglia 用的是Isolectin B4。
不過 問題來了 因為腦切片的背景螢光時在太亮了
導致於裡面染的螢光幾乎微弱或跟背景融為一體
我用的固定方法是4% paraformaldehyde
之前是用先前配好的，凍在-20 度 要用再回溫
有試過新鮮配的，雖然有降低，不過還是有背景螢光，
請問有人知道還有別的好方法來固定嗎 然後還要保持腦切片的完整性
固定的時間跟濃度可否也一起說一下，謝謝了
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◆ From: 77.8.167.209
※ 編輯: catalyst 來自: 77.8.167.209 (08/29 05:25)
1F：推 veltine:不知道你有沒有用雙染，看看另外的蛋白螢光是不是背景很強 08/29 05:47
2F：→ veltine:假如沒有的話，代表抗體專一性不好，用ED-1或是OX-42也可 08/29 05:48
3F：→ veltine:以染到reactive microglia/macrophage… 08/29 05:49
4F：→ veltine:假如兩種螢光背景都很強的話，考慮一下blocking時間久一些 08/29 05:51
5F：→ veltine:以上…僅供參考…Orz 08/29 05:52
6F：→ catalyst:我是單染，然後其實它也不是抗體，只是一種蛋白質， 08/29 06:47
7F：→ catalyst:會認microglia 上的醣類 專一性應該是還ok 08/29 06:48
8F：→ catalyst:就是腦切片的內部自體螢光有點高 不過還是謝謝你的建議 08/29 06:49
9F：推 veltine:sorry...現在我才知道B4-isolectin不是抗體…Orz 08/29 14:43
10F：→ veltine:你提到的是組織自發螢光…想到我以前用的玻片（乾淨）也會 08/29 14:44
11F：→ veltine:自發螢光…所以上網請用google…打入tissue autofluoresce 08/29 14:45
12F：→ veltine:會有一些解決的方法…以上…僅供參考…Orz 08/29 14:46
13F：推 sGoat:植物也會有很多自發螢光(爆),通常不是用不同激發光區分 08/29 15:19
14F：→ sGoat:就是要參考看看有沒有濾色片了 08/29 15:20
15F：→ catalyst:謝謝了 09/01 20:48