作者catalyst (abc)
看板Biotech
标题[求救] 请问降低背景萤光的固定方法
时间Fri Aug 29 05:10:30 2008
最近在做小鼠脑的切片 切片的厚度是350 micro meter
培养几天後再染色看萤光表现。萤光是染microglia 用的是Isolectin B4。
不过 问题来了 因为脑切片的背景萤光时在太亮了
导致於里面染的萤光几乎微弱或跟背景融为一体
我用的固定方法是4% paraformaldehyde
之前是用先前配好的，冻在-20 度 要用再回温
有试过新鲜配的，虽然有降低，不过还是有背景萤光，
请问有人知道还有别的好方法来固定吗 然後还要保持脑切片的完整性
固定的时间跟浓度可否也一起说一下，谢谢了
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◆ From: 77.8.167.209
※ 编辑: catalyst 来自: 77.8.167.209 (08/29 05:25)
1F：推 veltine:不知道你有没有用双染，看看另外的蛋白萤光是不是背景很强 08/29 05:47
2F：→ veltine:假如没有的话，代表抗体专一性不好，用ED-1或是OX-42也可 08/29 05:48
3F：→ veltine:以染到reactive microglia/macrophage… 08/29 05:49
4F：→ veltine:假如两种萤光背景都很强的话，考虑一下blocking时间久一些 08/29 05:51
5F：→ veltine:以上…仅供参考…Orz 08/29 05:52
6F：→ catalyst:我是单染，然後其实它也不是抗体，只是一种蛋白质， 08/29 06:47
7F：→ catalyst:会认microglia 上的醣类 专一性应该是还ok 08/29 06:48
8F：→ catalyst:就是脑切片的内部自体萤光有点高 不过还是谢谢你的建议 08/29 06:49
9F：推 veltine:sorry...现在我才知道B4-isolectin不是抗体…Orz 08/29 14:43
10F：→ veltine:你提到的是组织自发萤光…想到我以前用的玻片（乾净）也会 08/29 14:44
11F：→ veltine:自发萤光…所以上网请用google…打入tissue autofluoresce 08/29 14:45
12F：→ veltine:会有一些解决的方法…以上…仅供参考…Orz 08/29 14:46
13F：推 sGoat:植物也会有很多自发萤光(爆),通常不是用不同激发光区分 08/29 15:19
14F：→ sGoat:就是要参考看看有没有滤色片了 08/29 15:20
15F：→ catalyst:谢谢了 09/01 20:48