作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
標題[求救] 使用pET-29載體進行ligation
時間Fri Aug 29 00:18:23 2008
最近一個約1.5kb的片刻要表現
是用pET-29進行Ligation
切位是 NdeI & XhoI
我是兩種酵素同時去切，再接
轉形後!!
也有長出菌株
可是抽出的質體
我再用酵素cleavage確定有沒接上
可是...就是切不出我要的(size不對...)
問的結果說是可能當初就沒切好
不然就是沒接上
想請問...到底可能是哪裡出問題了??
是不是一定要分開切??
麻煩大家幫我一下了!!謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.131.25.40
1F：推 sGoat:請問有check過insert上相同的切位嗎? 08/29 13:50
2F：→ sGoat:沒有相同切位太近或是insert有切位的話是可以一起切的 08/29 14:25
3F：→ sGoat:不過要使用他建議的buffer 08/29 14:25
4F：→ bbiioo:當初PCR就有設計切位進去!!buffer也用他建議的.. 08/29 23:08
5F：推 sGoat:我意思是你insert有沒有被切成兩段?所以才會接出來size不同 08/30 10:25
6F：推 lovesteve:分開切～ NEB可以一起切 Takara的或其他可能要分開 08/30 22:58
7F：→ bbiioo:insert切完有跑膠check就一條band在一樣大小的位置 08/31 22:50
8F：→ bbiioo:而且當初有確定insert內是沒設計的切位的 08/31 22:51