作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
标题[求救] 使用pET-29载体进行ligation
时间Fri Aug 29 00:18:23 2008
最近一个约1.5kb的片刻要表现
是用pET-29进行Ligation
切位是 NdeI & XhoI
我是两种酵素同时去切，再接
转形後!!
也有长出菌株
可是抽出的质体
我再用酵素cleavage确定有没接上
可是...就是切不出我要的(size不对...)
问的结果说是可能当初就没切好
不然就是没接上
想请问...到底可能是哪里出问题了??
是不是一定要分开切??
麻烦大家帮我一下了!!谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.131.25.40
1F：推 sGoat:请问有check过insert上相同的切位吗? 08/29 13:50
2F：→ sGoat:没有相同切位太近或是insert有切位的话是可以一起切的 08/29 14:25
3F：→ sGoat:不过要使用他建议的buffer 08/29 14:25
4F：→ bbiioo:当初PCR就有设计切位进去!!buffer也用他建议的.. 08/29 23:08
5F：推 sGoat:我意思是你insert有没有被切成两段?所以才会接出来size不同 08/30 10:25
6F：推 lovesteve:分开切～ NEB可以一起切 Takara的或其他可能要分开 08/30 22:58
7F：→ bbiioo:insert切完有跑胶check就一条band在一样大小的位置 08/31 22:50
8F：→ bbiioo:而且当初有确定insert内是没设计的切位的 08/31 22:51