作者veltine (Time go by~~~)
看板Biotech
標題[求救] 分段cloning
時間Thu Aug 28 05:59:46 2008
已經卡很久的cloning…Orz
小弟正在clone一個3.5kb的轉錄因子…
由於primer專一性不夠高，所以想分段clone…
之後再接起來…因為沒有分段clone再接起來的經驗…
所以請問大家…
Q1：整個序列為3.5kb，要把它拆成多大進行clone呢？
如1.7kb和1.8kb兩段或是1kb、1kb、1.5kb…
Q2：PCR之後，直接切PCR產物，之後liagation，再
subclone到我的vector上，還是先接上某一個
片段到vector上，再接另一個片段？請問那一種
方法比較好？
感謝大家…
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◆ From: 91.3.165.60
1F：推 sGoat:這樣做不如把primer專一度提高,細心一點clone全片段好歐 08/28 08:14
2F：→ sGoat:因為你又切又接,要用哪個酵素切?會不會夾雜vector片段進去? 08/28 08:16
3F：→ sGoat:不然就要設計成2.5K 2.5K P兩次再把產物混在一起P出全長 08/28 08:19
4F：→ sGoat:所謂megaprimer是也... 08/28 08:20
5F：推 ookubo:我也是建議直接整段接進去...3.5K還蠻好接的啦~~ 08/28 10:06
6F：→ dankai:整段接~之後拿裡面的primer去分段定~ 08/28 13:49