作者veltine (Time go by~~~)
看板Biotech
标题[求救] 分段cloning
时间Thu Aug 28 05:59:46 2008
已经卡很久的cloning…Orz
小弟正在clone一个3.5kb的转录因子…
由於primer专一性不够高，所以想分段clone…
之後再接起来…因为没有分段clone再接起来的经验…
所以请问大家…
Q1：整个序列为3.5kb，要把它拆成多大进行clone呢？
如1.7kb和1.8kb两段或是1kb、1kb、1.5kb…
Q2：PCR之後，直接切PCR产物，之後liagation，再
subclone到我的vector上，还是先接上某一个
片段到vector上，再接另一个片段？请问那一种
方法比较好？
感谢大家…
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◆ From: 91.3.165.60
1F：推 sGoat:这样做不如把primer专一度提高,细心一点clone全片段好欧 08/28 08:14
2F：→ sGoat:因为你又切又接,要用哪个酵素切?会不会夹杂vector片段进去? 08/28 08:16
3F：→ sGoat:不然就要设计成2.5K 2.5K P两次再把产物混在一起P出全长 08/28 08:19
4F：→ sGoat:所谓megaprimer是也... 08/28 08:20
5F：推 ookubo:我也是建议直接整段接进去...3.5K还蛮好接的啦~~ 08/28 10:06
6F：→ dankai:整段接~之後拿里面的primer去分段定~ 08/28 13:49