※ 引述《[email protected] (觀察者)》之銘言： > ※ 引述《[email protected] (六百)》之銘言： > : 對 > : 通常是 glycerol > : 推 Invec:加對半體積已滅菌甘油 貯存於-20不會凝固 自行調整稀釋倍率 > 請問你的意思是說50 uL的抗體，自己再捕50 uL滅菌甘油進去嗎？ 我想推文網友的意思就是那樣 > : 看 datasheet 上面會寫這隻抗體是溶在什麼東西裡面 > : 有 glycerol 的就是可以在 -20C 維持液態的 > 我想請問一下，如果有抗凍的，是否就比較經的起多次回溫？ 重點是抗凍的不需要回溫啊 他在 -20 就是液體了 你直接取用你需要的量 其他馬上冰回去 根本不要回溫 > 結凍會損壞抗體的原因，是不是因為水的氫鍵呢？ 化學忘光了 *>_<* 就我所記得的解釋是 冷凍也會造成蛋白質的變性 只是這種變性為可逆的 但是說是可逆 並不保證你解凍以後就會直接 refolding 成正確的樣子 很多時候 蛋白質溶液重複冷凍解凍會造成沉澱 我想 你絕對不想你的抗體沉澱下來吧? XD > : 分成十個 5uL 或者是 五個 10uL 冰在 -20C > : 用的時候拿一管出來 解凍 取用你需要的量 > : 剩下來的放 4C > 請問不管什麼抗體，也不管有沒有抗凍，都應該這樣做嗎？ > 大家是抗體一送到就開始分裝或是先冰到-20度，等有空再分？ RTFM!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 呃 我是說，看 datasheet 啦 有的抗體還特別強調不能冷凍喔 原廠的說明真的要看清楚 > : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 整個泡成 working 的濃度 > : （用 BSA 或是 normal serium, 不要用牛奶, NaN3 自己斟酌） 用剩下的放 4C > : 抗體在 4C 只要不長東西 維持半年通常沒問題 > : 基本上根據個人經驗與迷信 > : 5% normal serium + 0.01% NaN3 的抗體 working solution = 4C 金剛不壞 > 請問normal serium就是FBS嗎？ 如果你用的是來自牛的抗體 那 normal serium 就可以是 FBS........... 這裡說的 normal serium 指的其實是 跟抗體來源同物種的未免疫血清 > : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 用買來專門溶一抗的 buffer 配好 > : 用剩下的放 4C, 甚至有些 buffer 號稱泡出來可以放室溫幾個月 > 嗯...我主要處理western，一抗二抗都丟在blocking buffer中。假設我一次只用1uL， > 而分裝一管5 uL的話，把這5 uL全丟到blocking buffer應該很糟糕吧？ 其實是 case by case 怎麼作考量的因素很多 比方說你的 抗體是什麼, buffer 是什麼 你往後的實驗日期有沒有規劃好等等 一個大原則是 血清，腹水這類型態的抗體是非常穩定的 不稀釋最好 只要不長菌／發霉（這有難度） 放在 4C 幾個月都活跳跳 相對的 純化過的抗體 穩定程度就差很多了 如果不冷凍 寧可盡快泡到適當的 working buffer 裡面 > 所以我應該一次取 1 ul，剩下沒用到的就放 "4度C" ，而不是 "-20度C" ，請問 > 這樣對嗎？還是說要再捕一些你說的NaN3呢？ 看你 不過不稀釋的話 加 NaN3 那麼一點點 有難度吧 再次強調 Datasheet 一定要看 有些產品裡面就有 NaN3 （或是其他抑菌劑）了 這就解決了一切苦惱 但是另外要注意 NaN3 會干擾 HRP 的效果 所以如果二抗是用 HRP 而一抗裡面有 NaN3, wash 要特別確實 而 HRP 的二抗當然是絕對不能加 NaN3 > 另外就是，我希望我的western 一抗要reuse，既然都已經丟到blocking buffer中了， > 也是擺4度C而不是擺-20度C嗎？ 同樣要另外補NaN3嗎？ blocking buffer 不要用牛奶 強烈建議要加 NaN3 運氣好的話可以用很久很久 -- PTT 的推文站外看不到 本文來自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即時通生物科技相關諮詢服務，每小時十五美金，請支付予聯合勸募 意者請連絡 boblutw ＠ hotmail.com -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: 97-112-76-89.dlth.qwest.net