※ 引述《[email protected] (观察者)》之铭言： > ※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： > : 对 > : 通常是 glycerol > : 推 Invec:加对半体积已灭菌甘油 贮存於-20不会凝固 自行调整稀释倍率 > 请问你的意思是说50 uL的抗体，自己再捕50 uL灭菌甘油进去吗？ 我想推文网友的意思就是那样 > : 看 datasheet 上面会写这只抗体是溶在什麽东西里面 > : 有 glycerol 的就是可以在 -20C 维持液态的 > 我想请问一下，如果有抗冻的，是否就比较经的起多次回温？ 重点是抗冻的不需要回温啊 他在 -20 就是液体了 你直接取用你需要的量 其他马上冰回去 根本不要回温 > 结冻会损坏抗体的原因，是不是因为水的氢键呢？ 化学忘光了 *>_<* 就我所记得的解释是 冷冻也会造成蛋白质的变性 只是这种变性为可逆的 但是说是可逆 并不保证你解冻以後就会直接 refolding 成正确的样子 很多时候 蛋白质溶液重复冷冻解冻会造成沉淀 我想 你绝对不想你的抗体沉淀下来吧? XD > : 分成十个 5uL 或者是 五个 10uL 冰在 -20C > : 用的时候拿一管出来 解冻 取用你需要的量 > : 剩下来的放 4C > 请问不管什麽抗体，也不管有没有抗冻，都应该这样做吗？ > 大家是抗体一送到就开始分装或是先冰到-20度，等有空再分？ RTFM!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 呃 我是说，看 datasheet 啦 有的抗体还特别强调不能冷冻喔 原厂的说明真的要看清楚 > : 或者是 用的时候拿一管出来 解冻 整个泡成 working 的浓度 > : （用 BSA 或是 normal serium, 不要用牛奶, NaN3 自己斟酌） 用剩下的放 4C > : 抗体在 4C 只要不长东西 维持半年通常没问题 > : 基本上根据个人经验与迷信 > : 5% normal serium + 0.01% NaN3 的抗体 working solution = 4C 金刚不坏 > 请问normal serium就是FBS吗？ 如果你用的是来自牛的抗体 那 normal serium 就可以是 FBS........... 这里说的 normal serium 指的其实是 跟抗体来源同物种的未免疫血清 > : 或者是 用的时候拿一管出来 解冻 用买来专门溶一抗的 buffer 配好 > : 用剩下的放 4C, 甚至有些 buffer 号称泡出来可以放室温几个月 > 嗯...我主要处理western，一抗二抗都丢在blocking buffer中。假设我一次只用1uL， > 而分装一管5 uL的话，把这5 uL全丢到blocking buffer应该很糟糕吧？ 其实是 case by case 怎麽作考量的因素很多 比方说你的 抗体是什麽, buffer 是什麽 你往後的实验日期有没有规划好等等 一个大原则是 血清，腹水这类型态的抗体是非常稳定的 不稀释最好 只要不长菌／发霉（这有难度） 放在 4C 几个月都活跳跳 相对的 纯化过的抗体 稳定程度就差很多了 如果不冷冻 宁可尽快泡到适当的 working buffer 里面 > 所以我应该一次取 1 ul，剩下没用到的就放 "4度C" ，而不是 "-20度C" ，请问 > 这样对吗？还是说要再捕一些你说的NaN3呢？ 看你 不过不稀释的话 加 NaN3 那麽一点点 有难度吧 再次强调 Datasheet 一定要看 有些产品里面就有 NaN3 （或是其他抑菌剂）了 这就解决了一切苦恼 但是另外要注意 NaN3 会干扰 HRP 的效果 所以如果二抗是用 HRP 而一抗里面有 NaN3, wash 要特别确实 而 HRP 的二抗当然是绝对不能加 NaN3 > 另外就是，我希望我的western 一抗要reuse，既然都已经丢到blocking buffer中了， > 也是摆4度C而不是摆-20度C吗？ 同样要另外补NaN3吗？ blocking buffer 不要用牛奶 强烈建议要加 NaN3 运气好的话可以用很久很久 -- PTT 的推文站外看不到 本文来自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即时通生物科技相关谘询服务，每小时十五美金，请支付予联合劝募 意者请连络 boblutw ＠ hotmail.com -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: 97-112-76-89.dlth.qwest.net