※ 引述《[email protected] (六百)》之銘言： : > 拿出來都直接取，不過看起來都還是液態，不曉得是否有加所謂的"抗凍劑" : 對 : 通常是 glycerol : 推 Invec:加對半體積已滅菌甘油 貯存於-20不會凝固 自行調整稀釋倍率 請問你的意思是說50 uL的抗體，自己再捕50 uL滅菌甘油進去嗎？ : > 現在回到antibody上，而且是要冰-20度的那種。 : > 我不曉得antibody是否像我用過的polymerase一樣也可以保持液態，如果會凝固的話， : > 我想分裝應該是絕對必要的手段，不過如果是可以保持液態的話，大家是否還會另外 : > 分裝呢？要如何知道有沒有抗凍呢？ : 看 datasheet 上面會寫這隻抗體是溶在什麼東西裡面 : 有 glycerol 的就是可以在 -20C 維持液態的 我想請問一下，如果有抗凍的，是否就比較經的起多次回溫？ 結凍會損壞抗體的原因，是不是因為水的氫鍵呢？ : > 另外一個問題就是假設買來的antibody就有50ul，可是做一次western就只要1ul甚至 : > 不到（因為稀釋比在10000以上），請問這樣要怎麼分裝呢？ : > 總不能拿50個PCR用的小eppendorf分裝再塞得整盒都只有一種antibody吧？ : 分成十個 5uL 或者是 五個 10uL 冰在 -20C : 用的時候拿一管出來 解凍 取用你需要的量 : 剩下來的放 4C 請問不管什麼抗體，也不管有沒有抗凍，都應該這樣做嗎？ 大家是抗體一送到就開始分裝或是先冰到-20度，等有空再分？ : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 整個泡成 working 的濃度 : （用 BSA 或是 normal serium, 不要用牛奶, NaN3 自己斟酌） 用剩下的放 4C : 抗體在 4C 只要不長東西 維持半年通常沒問題 : 基本上根據個人經驗與迷信 : 5% normal serium + 0.01% NaN3 的抗體 working solution = 4C 金剛不壞 請問normal serium就是FBS嗎？ : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 用買來專門溶一抗的 buffer 配好 : 用剩下的放 4C, 甚至有些 buffer 號稱泡出來可以放室溫幾個月 嗯...我主要處理western，一抗二抗都丟在blocking buffer中。假設我一次只用1uL， 而分裝一管5 uL的話，把這5 uL全丟到blocking buffer應該很糟糕吧？ 所以我應該一次取 1 ul，剩下沒用到的就放 "4度C" ，而不是 "-20度C" ，請問 這樣對嗎？還是說要再捕一些你說的NaN3呢？ 另外就是，我希望我的western 一抗要reuse，既然都已經丟到blocking buffer中了， 也是擺4度C而不是擺-20度C嗎？ 同樣要另外補NaN3嗎？ -- 太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭， 這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。 --

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