※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： : > 拿出来都直接取，不过看起来都还是液态，不晓得是否有加所谓的"抗冻剂" : 对 : 通常是 glycerol : 推 Invec:加对半体积已灭菌甘油 贮存於-20不会凝固 自行调整稀释倍率 请问你的意思是说50 uL的抗体，自己再捕50 uL灭菌甘油进去吗？ : > 现在回到antibody上，而且是要冰-20度的那种。 : > 我不晓得antibody是否像我用过的polymerase一样也可以保持液态，如果会凝固的话， : > 我想分装应该是绝对必要的手段，不过如果是可以保持液态的话，大家是否还会另外 : > 分装呢？要如何知道有没有抗冻呢？ : 看 datasheet 上面会写这只抗体是溶在什麽东西里面 : 有 glycerol 的就是可以在 -20C 维持液态的 我想请问一下，如果有抗冻的，是否就比较经的起多次回温？ 结冻会损坏抗体的原因，是不是因为水的氢键呢？ : > 另外一个问题就是假设买来的antibody就有50ul，可是做一次western就只要1ul甚至 : > 不到（因为稀释比在10000以上），请问这样要怎麽分装呢？ : > 总不能拿50个PCR用的小eppendorf分装再塞得整盒都只有一种antibody吧？ : 分成十个 5uL 或者是 五个 10uL 冰在 -20C : 用的时候拿一管出来 解冻 取用你需要的量 : 剩下来的放 4C 请问不管什麽抗体，也不管有没有抗冻，都应该这样做吗？ 大家是抗体一送到就开始分装或是先冰到-20度，等有空再分？ : 或者是 用的时候拿一管出来 解冻 整个泡成 working 的浓度 : （用 BSA 或是 normal serium, 不要用牛奶, NaN3 自己斟酌） 用剩下的放 4C : 抗体在 4C 只要不长东西 维持半年通常没问题 : 基本上根据个人经验与迷信 : 5% normal serium + 0.01% NaN3 的抗体 working solution = 4C 金刚不坏 请问normal serium就是FBS吗？ : 或者是 用的时候拿一管出来 解冻 用买来专门溶一抗的 buffer 配好 : 用剩下的放 4C, 甚至有些 buffer 号称泡出来可以放室温几个月 嗯...我主要处理western，一抗二抗都丢在blocking buffer中。假设我一次只用1uL， 而分装一管5 uL的话，把这5 uL全丢到blocking buffer应该很糟糕吧？ 所以我应该一次取 1 ul，剩下没用到的就放 "4度C" ，而不是 "-20度C" ，请问 这样对吗？还是说要再捕一些你说的NaN3呢？ 另外就是，我希望我的western 一抗要reuse，既然都已经丢到blocking buffer中了， 也是摆4度C而不是摆-20度C吗？ 同样要另外补NaN3吗？ -- 太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。 万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头， 这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。 吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。 我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。 --

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