作者yaliu (雅)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE sample總是跑不出來
時間Sat Aug 16 04:13:13 2008
最近剛接觸SDS-PAGE
但總是遇到很詭異的問題
我的sample是直接E. coli用sample buffer破菌
然後沸水煮個5分鐘，冰上冷卻後直接loading
但很奇怪的是，sample沒有band（正常整條lane應該會是很多band的pattern）
我跑出來是一整個拖曳
說是量太多smear也不太可能
因為我染出來的拖曳很微弱，根本不像是量多的感覺
而我每次跑的marker都很正常，用的是prestain的marker
所以感覺好像是我sample有問題
但是問題來了
有一次跟別的實驗室要了他們一片PAGE
sample新鮮做的
當時一跑就跑出pattern了
可是之後我自己再試做一次膠
跑同樣的sample(當初有跑出pattern的sample)
竟然sample跑不出pattern了，這到底是為什麼？？？
我的marker一樣很漂亮都有跑出來
難道是我做膠技術的問題嗎？？ 但是marker正常耶
另外，想問一下，是不是每次跑，sample都要再煮一次阿（我第二次跑的沒煮）
煮完我都是用spin的，還是其實應該要離心？？
真的不懂到底為什麼我就是跑不出正常的sample？？
卡了兩個禮拜還是不知道問題所在 Q_Q
謝謝各位了！！
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◆ From: 118.161.184.12
※ 編輯: yaliu 來自: 118.161.184.12 (08/16 04:16)
1F：推 timbrian:破完用"冷水"降溫 "10000rpm"以上離心"30分鐘"就解決了 08/16 09:50
2F：推 qqo8855436:煮完放冰箱一週一樣ok啦~ ^^" 08/16 10:04
3F：推 wensing:我也遇過你的問題，隨後，我都是用低率功的超音波破菌機 08/16 10:50
4F：→ wensing:震一震 就解決了 08/16 10:51
5F：→ yaliu:可是為什麼同樣的sample第二次會跑不出來？？ 08/16 13:30
6F：推 turtle24:染膠的dye是不是reuse太多次稀釋掉了? 08/16 13:44
7F：→ yaliu:我拿新的染劑，染的時間也一樣耶 08/16 14:07
8F：推 qumai:spin跟離心有什麼不一樣@@ 08/16 22:45
9F：→ yaliu:我都稱短暫離心為spin，離心就是那種真正離很久的(個人講法) 08/16 23:33