作者yaliu (雅)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE sample总是跑不出来
时间Sat Aug 16 04:13:13 2008
最近刚接触SDS-PAGE
但总是遇到很诡异的问题
我的sample是直接E. coli用sample buffer破菌
然後沸水煮个5分钟，冰上冷却後直接loading
但很奇怪的是，sample没有band（正常整条lane应该会是很多band的pattern）
我跑出来是一整个拖曳
说是量太多smear也不太可能
因为我染出来的拖曳很微弱，根本不像是量多的感觉
而我每次跑的marker都很正常，用的是prestain的marker
所以感觉好像是我sample有问题
但是问题来了
有一次跟别的实验室要了他们一片PAGE
sample新鲜做的
当时一跑就跑出pattern了
可是之後我自己再试做一次胶
跑同样的sample(当初有跑出pattern的sample)
竟然sample跑不出pattern了，这到底是为什麽？？？
我的marker一样很漂亮都有跑出来
难道是我做胶技术的问题吗？？ 但是marker正常耶
另外，想问一下，是不是每次跑，sample都要再煮一次阿（我第二次跑的没煮）
煮完我都是用spin的，还是其实应该要离心？？
真的不懂到底为什麽我就是跑不出正常的sample？？
卡了两个礼拜还是不知道问题所在 Q_Q
谢谢各位了！！
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◆ From: 118.161.184.12
※ 编辑: yaliu 来自: 118.161.184.12 (08/16 04:16)
1F：推 timbrian:破完用"冷水"降温 "10000rpm"以上离心"30分钟"就解决了 08/16 09:50
2F：推 qqo8855436:煮完放冰箱一周一样ok啦~ ^^" 08/16 10:04
3F：推 wensing:我也遇过你的问题，随後，我都是用低率功的超音波破菌机 08/16 10:50
4F：→ wensing:震一震 就解决了 08/16 10:51
5F：→ yaliu:可是为什麽同样的sample第二次会跑不出来？？ 08/16 13:30
6F：推 turtle24:染胶的dye是不是reuse太多次稀释掉了? 08/16 13:44
7F：→ yaliu:我拿新的染剂，染的时间也一样耶 08/16 14:07
8F：推 qumai:spin跟离心有什麽不一样@@ 08/16 22:45
9F：→ yaliu:我都称短暂离心为spin，离心就是那种真正离很久的(个人讲法) 08/16 23:33