作者KIKO880 (大姑)
看板Biotech
標題Re: [求救] western blot transfer 效率不好
時間Thu Aug 14 21:16:39 2008
現在有找到一些方法
1.降低SDS PAGE%
不過我現在已經是用10%
2.transfer 久一點
之前都只有兩小時，今天已經在試O/N
3. buffer 加0.1% SDS 以及降低methanol濃度
如果膜是PVDF的話，可以不加methanol
4. wet 效率比semi-dry好
我是本來就用wet的了
謝謝各位大大的幫忙
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.24.253.22
1F：推 tsubasawolfy:我跑的ATM 350kd 用6%膠跑也要3小時... 08/15 00:27
2F：→ tsubasawolfy:wet transfer 20%MeOH 0.1%SDS 其他一樣 還是搞不出 08/15 00:28
3F：→ tsubasawolfy:來(transfer 3hr) 只好寄望用買的系統了Orz 08/15 00:29
4F：推 blence:ATM跟1981不用這麼麻煩,7%, 160V,70min,transfer用60V,4h或 08/15 00:34
5F：→ blence:或25V,o/n這種一般wet的條件都很好做,不會難,別被kda嚇到了 08/15 00:37
6F：推 blence:transfer以tris-glycine+15%methanol,NC membrane,不加SDS 08/15 00:51
7F：推 tsubasawolfy:25V O/N壓 這個可以試試 08/15 01:00
8F：→ tsubasawolfy:電泳會跑這麼久是因為marker最大到250 還在猶豫要不 08/15 01:01
9F：→ tsubasawolfy:要定invitrogne那支到500kd的.. 08/15 01:01
10F：→ tsubasawolfy:再不行就要把cell signaling Ab丟了- - 08/15 01:02
11F：推 hurdle:請問B大, 你用的ATM Ab是哪一家賣的啊~~ 08/15 01:20
12F：推 blence:Genetex, 2C1 08/15 02:19
13F：推 humwang:我以前做talin 250Kd,150mA兩小時,transfer非常的好... 08/15 20:44
14F：推 hurdle:B大, Genetex這支 ATM Ab可以做IHC(P)嗎? 08/16 00:08