作者KIKO880 (大姑)
看板Biotech
标题Re: [求救] western blot transfer 效率不好
时间Thu Aug 14 21:16:39 2008
现在有找到一些方法
1.降低SDS PAGE%
不过我现在已经是用10%
2.transfer 久一点
之前都只有两小时，今天已经在试O/N
3. buffer 加0.1% SDS 以及降低methanol浓度
如果膜是PVDF的话，可以不加methanol
4. wet 效率比semi-dry好
我是本来就用wet的了
谢谢各位大大的帮忙
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.24.253.22
1F：推 tsubasawolfy:我跑的ATM 350kd 用6%胶跑也要3小时... 08/15 00:27
2F：→ tsubasawolfy:wet transfer 20%MeOH 0.1%SDS 其他一样 还是搞不出 08/15 00:28
3F：→ tsubasawolfy:来(transfer 3hr) 只好寄望用买的系统了Orz 08/15 00:29
4F：推 blence:ATM跟1981不用这麽麻烦,7%, 160V,70min,transfer用60V,4h或 08/15 00:34
5F：→ blence:或25V,o/n这种一般wet的条件都很好做,不会难,别被kda吓到了 08/15 00:37
6F：推 blence:transfer以tris-glycine+15%methanol,NC membrane,不加SDS 08/15 00:51
7F：推 tsubasawolfy:25V O/N压 这个可以试试 08/15 01:00
8F：→ tsubasawolfy:电泳会跑这麽久是因为marker最大到250 还在犹豫要不 08/15 01:01
9F：→ tsubasawolfy:要定invitrogne那支到500kd的.. 08/15 01:01
10F：→ tsubasawolfy:再不行就要把cell signaling Ab丢了- - 08/15 01:02
11F：推 hurdle:请问B大, 你用的ATM Ab是哪一家卖的啊~~ 08/15 01:20
12F：推 blence:Genetex, 2C1 08/15 02:19
13F：推 humwang:我以前做talin 250Kd,150mA两小时,transfer非常的好... 08/15 20:44
14F：推 hurdle:B大, Genetex这支 ATM Ab可以做IHC(P)吗? 08/16 00:08