作者MrCAKE (Keep Working)
看板Biotech
標題Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
時間Thu Aug 14 17:59:11 2008
※ 引述《calmato (Anita~)》之銘言：
: : 至於你這邊沒有交代
: : 妳所run gel 的濃度是幾%
: : 不過會出現太淡的話又想要和primer 分開
: : ㄧ個就是大於5%gel ㄧ個就是用長片(30cm)的gel如果貴實驗室沒有
: : 那可以用跑protein page去做
: : 然後用低伏特run
: 我是用2%的argarous gel跑的
: 我發現超過3%以上就非常難做出這個gel
: 又很尷尬的是~敝實驗室主要不是做分生因此很多東西比較不專業
: 我們只是利用一點基礎的分生實驗做為一種工具
: 但光是這樣~對於毫無背景的我相當的吃力
: 因為資源和資訊都不充足的之下，要做出東西
: 我已經TRY很久了~實在也沒人可問
: 因此前來這請教各位前輩!
你可能要先克服無法做高濃度Agarose gel的問題
這應該很快解決 可能先問問附近有做分生的實驗室吧
不然把困難處po在這裡也可以
其實你的198bp產物和primer應該用2%就可以分開了
你的實驗重點是在用酵素切之前就要先確定沒有剩餘的primer的存在
不然到時候可能無法區分切完的產物跟primer
(你第一篇文章是說切完20bp和78bp?可是PCR產物又是198bp 是哪裡寫錯了嗎)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.201
※ 編輯: MrCAKE 來自: 140.112.60.201 (08/14 18:00)
1F：推 calmato:不好意思~打太快~是120和78bp 08/14 18:41
2F：推 krisnile:這麼小的片段可以用native PAGE來分離~ 08/14 20:44
3F：推 calmato:我們實驗室沒這種東西耶...^^" 08/14 21:25
4F：推 sGoat:找找看有沒有人有SFR Agarose借一些來用... 08/14 23:01
5F：→ sGoat:還有RE作用的位置不能離邊邊太近,酵素會不好結合上去不好切 08/14 23:02
6F：→ sGoat:如果是198要切成120+78應該還好,就多切幾次吧... 08/14 23:07
7F：→ MrCAKE:我用3.5% metaphor agarose可以分開100bp和104bp 給你參考 08/15 01:30