作者MrCAKE (Keep Working)
看板Biotech
标题Re: [求救]请问PCR products用restriction enzymeꐠ…
时间Thu Aug 14 17:59:11 2008
※ 引述《calmato (Anita~)》之铭言：
: : 至於你这边没有交代
: : 你所run gel 的浓度是几%
: : 不过会出现太淡的话又想要和primer 分开
: : ㄧ个就是大於5%gel ㄧ个就是用长片(30cm)的gel如果贵实验室没有
: : 那可以用跑protein page去做
: : 然後用低伏特run
: 我是用2%的argarous gel跑的
: 我发现超过3%以上就非常难做出这个gel
: 又很尴尬的是~敝实验室主要不是做分生因此很多东西比较不专业
: 我们只是利用一点基础的分生实验做为一种工具
: 但光是这样~对於毫无背景的我相当的吃力
: 因为资源和资讯都不充足的之下，要做出东西
: 我已经TRY很久了~实在也没人可问
: 因此前来这请教各位前辈!
你可能要先克服无法做高浓度Agarose gel的问题
这应该很快解决 可能先问问附近有做分生的实验室吧
不然把困难处po在这里也可以
其实你的198bp产物和primer应该用2%就可以分开了
你的实验重点是在用酵素切之前就要先确定没有剩余的primer的存在
不然到时候可能无法区分切完的产物跟primer
(你第一篇文章是说切完20bp和78bp?可是PCR产物又是198bp 是哪里写错了吗)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.201
※ 编辑: MrCAKE 来自: 140.112.60.201 (08/14 18:00)
1F：推 calmato:不好意思~打太快~是120和78bp 08/14 18:41
2F：推 krisnile:这麽小的片段可以用native PAGE来分离~ 08/14 20:44
3F：推 calmato:我们实验室没这种东西耶...^^" 08/14 21:25
4F：推 sGoat:找找看有没有人有SFR Agarose借一些来用... 08/14 23:01
5F：→ sGoat:还有RE作用的位置不能离边边太近,酵素会不好结合上去不好切 08/14 23:02
6F：→ sGoat:如果是198要切成120+78应该还好,就多切几次吧... 08/14 23:07
7F：→ MrCAKE:我用3.5% metaphor agarose可以分开100bp和104bp 给你参考 08/15 01:30