作者killm (...)
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標題[求救]請問PCR products用restriction enzyme切的問題
時間Thu Aug 14 00:48:33 2008
版主不好意思!!此篇是幫我姊姊代po的，如有不妥煩請告知，我會馬上刪除，
還有如果文章有什麼地方錯誤請多海涵。
==============================以下為正文=======================================
請想問一個關於使用restriction enzyme的問題，因為認識的沒有這領域專長
請問PCR products用restriction enzyme切的問題的所以想請問各位。請各位救救
我這位新手。
我在還沒切的PCR products 是198 bp，使用restriction enzyme是會分成為
20bp、78bp，但切前和切後我發現，切前marker 的100bp指標下每個sapmle
都會有霧霧的一條(有的人說那是primer的殘留，但後來跑PCR時我的primer
只加1μL，原本這樣的情況已經不見了，但這次我換了另ㄧ家廠商的Taq，不知
這和Taq的關係大不大 ? 因為換了後這次又出現了那條淡淡的ban)，這樣和我
有切的照片看起來，會覺得我有切的那照片真的切出來的下面一條是78bp還是
promer的殘留?
另外一個狀況是，我的templete DNA是口腔黏膜細胞，其實量的品質很不
一定，拿去跑PCR，不切的話ban算亮的，但ㄧ拿去切，就變的很淡，有沒有什
麼方法可以讓他清楚點?? DNA去測OD範圍有點廣 40~800 ng/μL，我一直try
條件，感覺都try不到比較好的狀態。想
請教各位前輩!感激不盡!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.130.73.58
1F：推 damyr:你的primer濃度多少? 感覺是你Primer太濃了 08/14 01:00
2F：推 yaliu:切之前有先純化過嗎？ 如果clean up過的話，primer會被去除 08/14 01:02
3F：推 chvkimo: 但是,loss會很多喔... 08/14 01:33
4F：→ chvkimo: 不過,只要偵測的話,loss量還是其次 08/14 01:33