作者killm (...)
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标题[求救]请问PCR products用restriction enzyme切的问题
时间Thu Aug 14 00:48:33 2008
版主不好意思!!此篇是帮我姊姊代po的，如有不妥烦请告知，我会马上删除，
还有如果文章有什麽地方错误请多海涵。
==============================以下为正文=======================================
请想问一个关於使用restriction enzyme的问题，因为认识的没有这领域专长
请问PCR products用restriction enzyme切的问题的所以想请问各位。请各位救救
我这位新手。
我在还没切的PCR products 是198 bp，使用restriction enzyme是会分成为
20bp、78bp，但切前和切後我发现，切前marker 的100bp指标下每个sapmle
都会有雾雾的一条(有的人说那是primer的残留，但後来跑PCR时我的primer
只加1μL，原本这样的情况已经不见了，但这次我换了另ㄧ家厂商的Taq，不知
这和Taq的关系大不大 ? 因为换了後这次又出现了那条淡淡的ban)，这样和我
有切的照片看起来，会觉得我有切的那照片真的切出来的下面一条是78bp还是
promer的残留?
另外一个状况是，我的templete DNA是口腔黏膜细胞，其实量的品质很不
一定，拿去跑PCR，不切的话ban算亮的，但ㄧ拿去切，就变的很淡，有没有什
麽方法可以让他清楚点?? DNA去测OD范围有点广 40~800 ng/μL，我一直try
条件，感觉都try不到比较好的状态。想
请教各位前辈!感激不尽!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.130.73.58
1F：推 damyr:你的primer浓度多少? 感觉是你Primer太浓了 08/14 01:00
2F：推 yaliu:切之前有先纯化过吗？ 如果clean up过的话，primer会被去除 08/14 01:02
3F：推 chvkimo: 但是,loss会很多喔... 08/14 01:33
4F：→ chvkimo: 不过,只要侦测的话,loss量还是其次 08/14 01:33