想請大家幫我看看 目前我在做overlap PCR 要把三段序列接再一起 分別是 sod promoter + sod gene + terminator promoter + sod size = 776 bp terminator size = 310 bp 已經成功將 promoter+sod 片段放進TA 定序也正確 之後再以此為模板進行PCR, primer改用和terminaor有互補的序列 另外terminator也同樣進行PCR 有得到310bp產物 最後再將兩個template 進行overlap PCR 產物有得到1086 bp片段 但是同時也有310 bp, 776 bp, 的產物 酵素是用Taq 得到產物以1086 bp最多 最後直接將Taq產物 和TA 作TA cloning 隔天挑點作colony PCR 都只有出現 1086 bp的片段 所以很高興的送定序 用TA-F和TA-R定 但結果只出現776 bp片段 完全沒有 terminator的存在 這是什麼情況 PCR有P出 但實際上卻沒有這段存在 我做了三次 都無法完整接出1086 片段 請問這是哪裡出了問題嗎? 謝謝大家的幫忙了 <(_ _)> -- 不要小看自己 因人有無限可能 --

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