想请大家帮我看看 目前我在做overlap PCR 要把三段序列接再一起 分别是 sod promoter + sod gene + terminator promoter + sod size = 776 bp terminator size = 310 bp 已经成功将 promoter+sod 片段放进TA 定序也正确 之後再以此为模板进行PCR, primer改用和terminaor有互补的序列 另外terminator也同样进行PCR 有得到310bp产物 最後再将两个template 进行overlap PCR 产物有得到1086 bp片段 但是同时也有310 bp, 776 bp, 的产物 酵素是用Taq 得到产物以1086 bp最多 最後直接将Taq产物 和TA 作TA cloning 隔天挑点作colony PCR 都只有出现 1086 bp的片段 所以很高兴的送定序 用TA-F和TA-R定 但结果只出现776 bp片段 完全没有 terminator的存在 这是什麽情况 PCR有P出 但实际上却没有这段存在 我做了三次 都无法完整接出1086 片段 请问这是哪里出了问题吗? 谢谢大家的帮忙了 <(_ _)> -- 不要小看自己 因人有无限可能 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.234.138