我目前將以誘導好的E.coli 1c.c離心後加入300 micro liter binding bf 放入eppendorf中以超音波震破 打1sec停1sec 一次打一分 總共打3次 發現我要的蛋白在上清液中比其他蛋白多蠻多的 但是一但以其他版大提供的方法 200 C.C菌離心+3~4 C.C binding bf去打 1 sec / 1 sec 共五分 總共打五次 卻發現我的主要要的蛋白在上清液中比其他蛋白少@@ 請問一下這是代表我要的蛋白被傷害到而沉澱所以變少了嗎 ? 那請問大家是怎樣破菌的條件? 我也試過100 c.c菌加入 10c.c binding bf 中打1 sec/ 1sec 7 min 覺得效果不是很好的樣子 而且很像有很多離不下來的lipid會擋到protein跟Ni的 binding... 不知道有沒有其他學長姐也曾碰過在在打少量確認蛋白是否可溶時 目標蛋白呈現 比其他蛋白多而在進行純化破菌時目標蛋白卻比其他雜蛋白少的問題.... 試了好久...純化一直有雜蛋白..我猜有可能是因為破菌後目標蛋白較少 所以被其他蛋白擋住 導致再怎麼洗 目標蛋白仍不純且少..是否有能人學長姐 能提供較好的破菌條件像是 時間濃度之類的..感激! --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.178.150